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可溶性包涵体蛋白复性(化学稀释I)试剂盒说明书
点击次数:1051 发布时间:2017-09-29

可溶性包涵体蛋白复性(化学稀释I)试剂盒产品说明书

主要用途

可溶性包涵体蛋白复性(化学稀释I)试剂是一种旨在使用化学稀释方法,使可溶性变性纯化蛋白重新折叠,恢复其蛋白功能和活性的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种可溶性纯化蛋白,尤其是细菌内重组蛋白(融合蛋白)以及可溶性处理的包涵体蛋白。可后续用于蛋白功能、酶活性等分析。产品即到即用,性能稳定,参数优化,操作便捷,复性效果理想。 技术背景 在蛋白纯化和融化过程中,特别是包涵体蛋白,变性剂(denaturant)提供了zui有效的手段,其获得的纯化蛋白属于变性蛋白(denatured protein)。为了使变性蛋白恢复为天然蛋白(native protein),即具有蛋白质的自然结构和活性,需要进行蛋白复性(renaturation)或重新折叠(refolding)。蛋白复性是一个复杂的过程,诸如pH、离子强度、低分子添加剂、氧化还原电位(redox potential)和温度等物化因子,影响体外蛋白复性的效率。通常体外复性的方法包括稀释法和缓冲交换法。前者通过化学处理,而后者采用物理方法(例如透析、膜过滤(diafiltration)、凝胶过滤层析(gel-filtration chromatography)等,以达到蛋白复性的效果。L-精氨酸(L-arginine)、聚乙二醇(PEG)、硫代甜菜碱(sulfobetaine)、去垢剂、变性剂等将影响化学稀释复性处理的效率。

产品内容

稀释液(Reagent A) 10毫升

还原液(Reagent B) 5毫升

平衡液(Reagent C) 5毫升

产品说明书 1份

保存方式

保存在-20℃冰箱里, 避免光照,有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管:用于样品保存的容器

恒温摇床:用于反应孵育

实验步骤

方法一:

还原复性

1.准备好可溶性纯化变性蛋白样品

2.移取适量的蛋白样品到1.5毫升离心管

3.加入适量的稀释液(Reagent A)调整蛋白浓度到10毫克/毫升

4.移取100微升蛋白样品到新的1.5毫升离心管

5.加入900微升还原液(Reagent B)

6.放进20℃恒温摇床孵育4小时,速度为200RPM

7.(选择步骤)移取10微升进行生物检测,例如蛋白功能或活性:比色法、HPLC、受体结合实验等确定复性蛋白活性值

8.即刻放进-70℃冰箱里保存

方法二:

平衡复性 

1.准备好可溶性纯化变性蛋白样品

2.移取适量的蛋白样品到1.5毫升离心管

3.加入适量的稀释液(Reagent A)调整蛋白浓度到5毫克/毫升

4.移取5微升蛋白样品到新的1.5毫升离心管

5.加入195微升平衡液(Reagent C)

6.放进28℃恒温摇床孵育2小时,速度为200RPM

7.(选择步骤)移取10微升进行生物检测,例如蛋白功能或活性:比色法、HPLC、受体结合实验等确定复性蛋白活性值

8.即刻放进-70℃冰箱里保存

注意事项

1.本产品为5次操作(还原和平衡各5次)

2.操作时须戴手套

3.本产品的复性效率达15至30%

4.建议与本公司系列包涵体蛋白溶解试剂盒配套使用

5.由于样品的特异性,用户可以优化温度、孵育时间、蛋白浓度,以获得zui大复性效率

6.如果复性效率过低,建议使用可溶性包涵体蛋白复性(物理透析)试剂盒-HL30044.5

7.如果获得满意的复性效果,用户可以按比例扩大复性容量

8.本公司提供系列包涵体蛋白处理试剂产品

质量标准

1.本产品经鉴定性能稳定

2.本产品经鉴定无蛋白酶污染

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