24小时服务热线

18918128223
网站首页  |  公司介绍  |  产品展示  |  公司新闻  |  资料下载  |  技术文章  |  在线咨询  |  联系我们
产品搜索
产品目录
ELISA试剂盒
标准品
培养基
检测试剂盒
细胞株
点击量多的产品
·
  技术文章 首页 >> 技术文章
细胞骨架(肌动蛋白微丝;F-ACTIN)绿色荧光染色试剂盒
点击次数:6550 更新时间:2017-01-17

HL10277.1 v.A

 

细胞骨架(肌动蛋白微丝;F-ACTIN)绿色荧光染色试剂盒产品说明书

 

主要用途

 

细胞骨架(肌动蛋白微丝;F-ACTIN)绿色荧光染色试剂是一种旨在使用异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽phalloidin,探寻细胞骨架丝状肌动蛋白的分布和局部定向变化状况的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种活体细胞(动物、人体、植物等)的细胞骨架装配的检测。产品严格无菌,即到即用,反应敏感,操作简捷,性能稳定。

 

技术背景

 

肌动蛋白(actin)是42KD的球蛋白,构成细胞骨架的微丝(microfilament)和肌肉收缩装置的细肌丝(thin filament),以及细胞膜表面伪足(pseudopodia微绒毛microvilli肌动蛋白存在于所有真核生物细胞中,且高度进化保留,参与各种重要细胞功能,包括细胞迁移、细胞分裂、肌肉收缩、细胞形态维护、膜转运(membrane trafficking) 等。哺乳动物具有六种异构体,分成α、β、γ三类。球状肌动蛋白(G-actin)在生理条件下,组合成长丝聚合体,转化为丝状肌动蛋白(F-actin),形成细胞骨架的微丝。肌动蛋白的聚合与解聚的动态学变化是细胞骨架装配(cytoskeleton assembly)的主要参数之一。鬼笔环肽phalloidin)是一种毒性菇类中分离的二环七肽bicyclic heptapeptide生物碱与聚合的微丝F-肌动蛋白结合,因此通过异硫氰酸荧光素(FITC)标记的鬼笔环肽可以体外探测细胞F-肌动蛋白的分布和含量,据此分析细胞骨架装配的调控机制。

 

产品内容

 

清理液(Reagent A)        毫升

固着液(Reagent B)        毫升

通透液(Reagent C)        毫升

封阻液(Reagent D)        毫升

染色液(Reagent E)      微升

复染液(Reagent F)       微升

产品说明书   1份

 

保存方式

 

保存染色液(Reagent E)和复染液(Reagent F)在-20℃冰箱里,避免反复冻融;其余的保存在4℃冰箱里,避免光照;有效保证6

 

用户自备

 

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液(12024):用于细胞脱离

*细胞培养液(12052):用于中和胰蛋白酶的处理

15毫升锥形离心管:用于样品操作的容器

1.5毫升离心管:用于细胞染色的容器

(微型)台式离心机:用于样品操作

荧光(共聚焦)显微镜:用于细胞荧光观察

 

实验步骤

 

实验开始前,将-20冰箱里的试剂置于室温下冻融。移取xx微升通透液(Reagent C1.5毫升离心管,然后分别加入xx微升染色液(Reagent E复染液(Reagent F,混匀后,标记为染色工作液,置于冰槽里,放进暗室里备用。然后进行下列操作。

 

  • 直接法

 

  • 准备1个细胞培养6孔板,内置1个细胞1 X 1 cm大小的载玻片
  • 接种待测细胞培养直至每孔铺满率达70 
  • 小心抽去细胞培养液
  • 轻轻加xx微清理液(Reagent A到细胞载玻片上,覆盖样品表面
  • 小心抽去清理液(Reagent A
  • 轻轻加xx微固着液(Reagent B到细胞载玻片上,覆盖样品表面
  • 置于冰槽里孵育30分钟
  • 小心抽去固着液(Reagent B
  • 轻轻加xx微通透液(Reagent C到细胞载玻片上,覆盖样品表面
  • 小心抽去通透液(Reagent C
  • 轻轻加xx微封阻液(Reagent D到细胞载玻片上,覆盖样品表面
  • 室温下孵育30分钟
  • 小心抽去封阻液(Reagent D
  • 轻轻加xx微清理液(Reagent A到细胞载玻片上,覆盖样品表面
  • 小心抽去清理液(Reagent A
  • 重复实验步骤14和15一次
  • 小心xx微升染色工作液 覆盖样品表面
  • 在暗室里室温下孵育60分钟
  • 小心抽去染色工作液
  • 轻轻加xx微清理液(Reagent A到细胞载玻片上,覆盖样品表面
  • 小心抽去清理液(Reagent A
  • 封片
  • 即刻在荧光(共聚焦)显微镜下进行观察(每个视野计数200个细胞)激发波长488nm,散发波长530nm(F-肌动蛋白染色)或激发波长350nm,散发波长460nm(细胞核色)――

绿色荧光显示F-肌动蛋白;蓝色荧光显示细胞核为圆环或椭圆状

 

  • 间接法

 

  • 准备125cm2细胞培养的待测细胞,直至铺满率达70%(约100万细胞数)
  • 小心移出细胞培养液到15毫升锥形离心管(收集悬浮细胞)
  • 加入xx毫升清理液(Reagent A,覆盖细胞表面
  • 小心移出xx毫升清理液(Reagent A15毫升锥形离心管 
  • 加入1毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液,铺满细胞表面
  • 放进37培养箱孵育1分种
  • 轻轻手击震动培养,使细胞脱落
  • 加入3毫升用户自备的*细胞培养液
  • 移入15毫升锥形离心管(注意:悬浮细胞可以由此步开始)
  • 放进台式离心机离心5分钟,速度为300g
  • 小心抽去上清液
  • 加入xx微清理液(Reagent A,混匀
  • 转入到1.5毫升离心管
  • 放进微型台式离心机离心5分钟,速度为300g(或1500RPM,例如EPPENDORF 5415)
  • 小心抽去上清液
  • 加入xx微固着液(Reagent B,混匀
  • 置于冰槽里孵育30分钟
  • 放进微型台式离心机离心5分钟,速度为300g(或1500RPM,例如EPPENDORF 5415)
  • 小心抽去上清液
  • 加入xx微通透液(Reagent C,混匀
  • 放进微型台式离心机离心5分钟,速度为300g(或1500RPM,例如EPPENDORF 5415)
  • 小心抽去上清液
  • 加入xx微封阻液(Reagent D,混匀
  • 室温下孵育30分钟
  • 放进微型台式离心机离心5分钟,速度为300g(或1500RPM,例如EPPENDORF 5415)
  • 小心抽去上清液
  • 加入xx微清理液(Reagent A,混匀
  • 放进微型台式离心机离心5分钟,速度为300g(或1500RPM,例如EPPENDORF 5415)
  • 小心抽去上清液
  • 加入xx微升染色工作液
  • 200微升枪头上下轻柔抽吸,混匀细胞颗粒群
  • 在暗室里室温下孵育60分钟 
  • 放进微型台式离心机离心5分钟,速度为300g(或1500RPM,例如EPPENDORF 5415)
  • 小心抽去上清液
  • 加入xx清理液(Reagent A,混匀
  • 放进微型台式离心机离心5分钟,速度为300g(或1500RPM,例如EPPENDORF 5415)
  • 小心抽去上清液
  • 加入200微升清理液(Reagent A,混匀
  • 即刻移取10微升在载玻片上压片
  • 荧光(共聚焦)显微镜下进行观察(每个视野计数200个细胞)激发波长488nm,散发波长530nm(F-肌动蛋白染色)或激发波长350nm,散发波长460nm(细胞核色)――

绿色荧光显示F-肌动蛋白;蓝色荧光显示细胞核为圆环或椭圆状

 

 

注意事项

 

  • 本产品为10次操作
  • 在整个操作过程中须戴手套,以防污染
  • 孵育时,必须避免光照
  • 建议检测细胞量达106细胞数为佳
  • 用户可以根据情况,适度调整试剂用量
  • 建议细胞染色完成后,即刻进行荧光分析,不宜超过1小时 
  • 注意:紫杉醇(PACLITAXEL),使F-肌动蛋白含量增加,荧光增强
  • 本公司提供系列细胞骨架检测试剂产品

 

质量标准

 

  • 本产品经鉴定性能稳定
  • 本产品经鉴定荧光清晰
上一章:乙酰胆碱酯酶活性抑制剂筛选比色法检测试剂盒 下一章:细胞乙醛脱氢酶2活性比色法定量检测试剂盒
推荐产品
·小鼠c-fos ELISA试剂盒价格
·小鼠还原型谷胱甘肽(GSH)ELISA试剂盒价格
·小鼠氧化型谷胱甘肽(GSSG)ELISA试剂盒价格
·小鼠解整合素样金属蛋白酶9(ADAM9)ELISA试剂盒价格
·小鼠钥孔虫戚血蓝蛋白(KLH)ELISA试剂盒价格
·小鼠抗核抗体(ANA)ELISA试剂盒价格
最新产品
·脂质组学全定量服务
·靶标定量服务
·固相微萃取服务
·靶标代谢组学服务
·cirRNA测序服务
·miRNA测序服务
·lncRNA测序服务
·mRNA测序服务
较早新闻
·备货通知函
·配制只需三分钟,快来申请试用片剂PBS吧
·ELISA试剂盒实验操作技巧
·小心买到ELISA试剂盒假货
·不同情况下的ELISA试剂盒应该如何保存?
·放 假 通 知
较早技术文章
·活体细胞溶酶体膜通透性(LMP)/完整性吖啶橙荧光检测流程
·细胞骨架(肌动蛋白微丝;F-ACTIN)绿色荧光染色试剂盒
·石蜡切片脂质油红O间接染色试剂盒
·冰冻切片总胆固醇(酯酶法)菲律宾)荧光染色试剂盒
·真菌/酵母细胞线粒体损伤/氧化(NAO)荧光测定试剂盒
·细胞内质网内钙离子浓度荧光检测试剂盒
| 网站首页 | 公司介绍 | 产品展示 | 公司新闻 | 资料下载 | 技术文章 | 在线咨询 | 联系我们 |
上海宸功生物技术有限公司 版权所有 总访问量:284401 地址:上海市杨浦区国定东路275号 邮编:
电话: 传真: 手机:18918128223 联系人:陈女士
邮箱:1828267695@qq.com  GoogleSitemap 网址:www.chenbio.com 管理登陆 ICP备案号:沪ICP备16011913号-1