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细菌硫化氢含量比色法定量检测试剂盒
点击次数:717 发布时间:2017-01-18

细菌硫化氢含量比色法定量检测试剂盒

产品说明书

 

主要用途

 

细菌硫化氢含量比色法定量检测试剂是一种旨在通过醋酸锌捕获吸收,溶解后与氯化铁分子反应测定样品中黑色的硫化铁产物,即采用比色法测算硫化氢含量的而经典的技术方法。该技经过研制、成功实验证明的。适用于各种细菌菌株硫化氢含量的检测。产品即到即用,操作简捷,性能稳定,检测敏感

 

技术背景

 

硫(sulfur)是地球上十种zui丰富的元素之一,其氧化还原形式通过硫循环(sulfur cycle)产生。其中硫化氢(hydrogen sulfide;H2S)是硫循环中的主要化合物,由微生物,包括细菌介导的反应产物。硫化氢是一种无色异味气体分子,常作为毒素和工业污染分子,同时也是人体的调节因子。许多细菌能够产生硫化氢,例普通变形杆菌Proteus vulgaris)、枸橼酸杆菌属Citrobacter spp)和产气荚膜梭菌Clostridium perfringens等,通过产生半胱氨酸脱硫酶(cysteine desulfurase),与辅酶酸吡哆醛pyridoxyl phosphate结合,使半胱氨酸脱氨基化(deamination), 产生硫化氢。硫化氢定性或定量检测可以用来鉴定细菌的生理特征,以及水质评价。基于硫化氢分子,受到醋酸锌zinc acetate捕获吸收,在二甲基对苯二胺二盐酸盐N,N-dimethyl-p-phenylenediamine溶液中溶解后,与氯化铁分子(三价铁;ferric)反应,生成黑色的硫化铁(iron sulfide)复合物,在分光光度仪(670nm 波长)下出现吸光峰值的变化,来定量测定样品中硫化氢的含量。 

 

产品内容

 

裂解液(Reagent A)

10毫升

萃取液(Reagent B)

7毫升

稀释液(Reagent C)

12毫升

去干扰液(Reagent D)

7毫升

溶解液(Reagent E)

2.5毫升

显色液(Reagent F)

2.5毫升

标准液(Reagent G)

200微升

产品说明书

1份

 

保存方式

 

保存在4冰箱里;去干扰液(Reagent D)、溶解液(Reagent E)和显色液(Reagent F)试剂具有腐蚀性,主要操作安全;有效保证6

 

用户自备

 

15毫升锥形离心管:用于样品操作的容器

1.5毫升离心管:用于标准样品配制和样品操作的容器

(微型)台式离心机:用于样品制备

超声仪:用于样品制备的仪器

比色皿:用于比色的容器

分光光度仪:用于比色分析

 

实验步骤

 

  • 样品准备

 

  • 准备好10毫升待测的细菌 
  • 转移15毫升锥形离心管
  • 放进4℃台式离心机离心5分钟,速度为1000g
  • 小心抽去上清液
  • 加入500微升裂解液(Reagent A,充分混匀
  • 转移到预冷的1.5毫升离心管
  • 在冰槽里,置于200瓦超声仪下,功率50%,猝击30,重复3次,期间置于冰槽里冷却
  • 放进4℃微型台式离心机离心15分钟,速度为16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415
  • 小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管
  • 移取10微升进行蛋白定量检测
  • 即刻放进-70保存或置于冰槽里继续后续操作

 

二、标准样品配制

 

  • 准备好上述制备的待测样品,置于冰槽里备用
  • 设定好分光光度仪:波长670nm,并置零 
  • 准备好51.5毫升离心管,标记为15号管
  • 分别加入50微升稀释液(Reagent C25号管
  • 移取100微升标准液(Reagent G1号管,混匀
  • 小心移取50微升1号管标准液(Reagent G2号管,混匀
  • 小心移取50微升2号管稀释的标准液(Reagent G3号管,混匀
  • 小心移取50微升3号管稀释的标准液(Reagent G4号管,混匀
  • 15号管放进冰槽里备用,避免光照;标准管浓度见下表

 

管号

稀释液(Reagent C

标准液(Reagent E

测定体系

标准硫化氢浓度

1

――

100微升

96微摩尔/升

2

50微升

50微升1号管

48微摩尔/升

3

50微升

50微升2号管

24微摩尔/升

4

50微升

50微升3号管

12微摩尔/升

5

50微升

0

0

 

 

 

  • 样品测定

 

  • 设定好分光光度仪或酶标仪:波长670nm,并置零
  • 分别移取50微升上述制备的标准样品或待测样品到1.5毫升离心管
  • 分别加入250微升萃取液(Reagent B)
  • 分别加入450微升稀释液(Reagent C),混匀
  • 室温下孵育10分钟
  • 分别加250微升去干扰液(Reagent D),混匀
  • 放进微型台式离心机离心10分钟,速度为10000g
  • 分别小心移取800微升上清液到比色皿
  • 分别加入100微升溶解液(Reagent E),混匀
  • 分别加入100微升显色液(Reagent F)
  • 室温下孵育20分钟,避免光照
  • 即刻放进分光光度仪检测:获得吸光读数
  • 构建标准曲线:纵座标(Y轴)为吸光读数;横座标(X轴)为标准硫化氢浓度(微摩尔/升
  • 根据标准曲线获得样品对应硫化氢浓度微摩尔/升
  • 计算样品实际硫化氢浓度微摩尔/升

 

【根据标准曲线获得样品对应硫化氢浓度(微摩尔/升)×1(体系容量:毫升)×样品稀释倍数】÷0.

05(样品容量:毫升)

 

 

注意事项

 

  • 本产品为25(20个样品)操作,包括标准液
  • 操作时,须戴手套
  • 样品中避免使用DTT等,否则干扰检测
  • 本产品测定理想范围在0100摩尔/
  • 去干扰液(Reagent D)、溶解液(Reagent E)显色液(Reagent F)试剂具有腐蚀性,主要操作安全
  • 孵育时,避免光照
  • 如果待测样品浓度过高或过低,可以调整样品浓度;注意在计算实际浓度时,不要忘记乘上样品稀释倍数
  • 本公司提供系列生化检测试剂产品

 

质量标准

 

  • 本产品经鉴定性能稳定
  • 本产品经鉴定检测敏感
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