细胞琥珀酸脱氢酶活性染色试剂盒 产品说明书 主要用途 细胞琥珀酸脱氢酶（SDH）活性染色试剂是一种旨在使用合成电子受体四氮唑兰染料，通过反应系统的作用，组织样本中酶活性部位呈现出蓝黑色沉淀现象的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种动物和人体细胞样品琥珀酸脱氢酶的活性检测。用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，显色清晰。 技术背景 琥珀酸脱氢酶（succinnate dehydrogenase；SDH；EC 1.3.99.1）是三羧酸循环（tricarboxylic acid cycle；TCA）或Krebs循环中与细胞线粒体膜相关的重要元素，位于线粒体内膜，参与细胞呼吸链。琥珀酸脱氢酶由27kd和70kd两个单体组成。其功能在于催化琥珀酸（succinate）的氧化反应，产生延胡索酸（furmarate），通过黄素腺嘌呤二核苷酸（Flavin Adenine Dinucleotide；FAD）传递电子。基于琥珀酸脱氢酶的反应原理，使用人工电子受体染料硝基蓝四氮唑（Nitro Blue Tetrazolium；NBT），接受来自还原型黄素腺嘌呤二核苷酸（Reduced flavin Adenine Dinucleotide；FADH2）的电子，而被还原，产生不溶性蓝色或蓝黑色甲暨色素。据此证明组织细胞琥珀酸脱氢酶的活性。 产品内容 清理液（Reagent A） | 毫升 | 染色液（Reagent B） | 毫升 | 反应液（Reagent C） | 毫升 | 固着液（Reagent D） | 毫升 | 产品说明书 | 1份 |
保存方式 保存染色液（Reagent B）和反应液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月 用户自备 1.5毫升离心管：用于工作液配制的容器 培养箱：用于反应孵育 光学显微镜：用于细胞染色后观察分析 实验步骤 操作一、25cm2细胞培养瓶染色 染色开始前，将－20℃冰箱里的试剂置于室温下融化；移取xx毫升染色液（Reagent B）到新的15毫升锥形离心管，加入xx微升反应液（Reagent C），混匀后，标记为染色工作液，置于冰槽里，避免光照。然后进行下列操作。 - 小心抽去25cm2细胞培养瓶里的培养液
- 小心加入xx毫升清理液（Reagent A），铺满整个样品表面
- 小心抽去清理液（Reagent A）
- 小心加入xx毫升染色工作液，铺满整个样品表面
- 放进37℃培养箱里孵育10分钟，避免光照
- 小心抽去染色工作液
- 小心加入xx毫升清理液（Reagent A），铺满整个样品表面
- 小心抽去清理液（Reagent A）
- 重复实验步骤7至8二次
- 小心加入xx毫升固着液（Reagent D），铺满整个样品表面
- 室温下孵育15分钟
- 小心抽去固着液（Reagent D）
- 小心加入xx毫升清理液（Reagent A），铺满整个样品表面
- 小心抽去清理液（Reagent A）
- 重复实验步骤13至14二次
- 即刻在光学显微镜下观察和计数：表达琥珀酸脱氢酶的组织细胞为阳性细胞，呈现蓝黑色。
操作二、24孔细胞培养板染色 染色开始前，将－20℃冰箱里的试剂置于室温下融化；移取xx微升染色液（Reagent B）到新的1.5毫升离心管，加入xx微升反应液（Reagent C），混匀后，标记为染色工作液，置于冰槽里，避免光照。然后进行下列操作。 - 小心抽去24孔细胞培养板里的培养液
- 小心加入xx微升清理液（Reagent A），铺满整个样品表面
- 小心抽去清理液（Reagent A）
- 小心加入xx微升染色工作液，铺满整个样品表面
- 放进37℃培养箱里孵育10分钟，避免光照
- 小心抽去染色工作液
- 小心加入xx微升清理液（Reagent A），铺满整个样品表面
- 小心抽去清理液（Reagent A）
- 重复实验步骤7至8二次
- 小心加入xx微升固着液（Reagent D），铺满整个样品表面
- 室温下孵育15分钟
- 小心抽去固着液（Reagent D）
- 小心加入xx微升清理液（Reagent A），铺满整个样品表面
- 小心抽去清理液（Reagent A）
- 重复实验步骤13至14二次
- 即刻在光学显微镜下观察和计数：表达琥珀酸脱氢酶的组织细胞为阳性细胞，呈现蓝黑色。
注意事项 - 本产品为50次（2个24孔板）或10次（10个25cm2细胞培养瓶）操作
- 操作时，须戴手套
- 反应液（Reagent C）避免反复冻融
- 阴性对照时，染色工作液不含有反应液（Reagent C）
- 可以使用50毫摩尔丙二酸钠（Sodium malonate）作为抑制剂
- 每次更换试剂溶液时，须抽干残留液体
- 整个操作，在避光状态下进行
- 染色孵育时间，根据样品和酶活性强弱调整，通常为5至10分钟
- 染色完成后，即刻进行光学显微镜观察
- 样品染色后保存，避免光照
- 本产品适合各种规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和各种培养孔板，须相应调整处理液：
操作容器 | 建议处理液规格 | 载玻片 | 100微升 | 载玻片培养皿 | 1毫升 | 35mm培养皿 | 1毫升 | 96孔培养板 | 100微升 | 48孔培养板 | 200微升 | 24孔培养板 | 500微升 | 12孔培养板 | 1毫升 | 6孔培养板 | 2毫升 | 25cm2细胞培养瓶 | 3毫升 |
质量标准 |
