全组织三磷酸腺苷酶活性染色试剂盒 产品说明书 主要用途 全组织三磷酸腺苷酶（ATP酶）活性染色试剂是一种旨在使用钙激活技术，在碱性条件下，由三磷酸腺苷酶催化水解产生的磷酸与钙离子结合，经过氯化钴的替换，zui后在硫化铵存在的情况下，呈现组织样本中酶活性部位的棕黑色沉淀现象的而经典的技术方法。该技术经过精心改良、成功实验证明的。主要适用于各种动物组织的酶活性检测。也可用于人体肌肉组织纤维的分型鉴定。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，灵敏牢固，显色清晰。 技术背景 三磷酸腺苷酶或ATP酶（adenosinetriphosphatase；ATPase）可催化ATP水解生成ADP及无机磷的反应，这一反应放出大量能量，用于运送离子进出细胞，同时供给生物体进行需能生命过程。它存在于生物细胞的多个部位，比如细胞质膜上和叶绿体类囊体膜上等，对整个生命的维持有着重要的作用。膜结合ATP酶存在多种形式：钠钾ATP酶、胞膜钙泵ATP酶（plasma membrane calcium ATPase；PMCA）或肌质网/内质网钙泵ATP酶（sarcoplasmic or endoplasmic reticulum calcium ATPases；SERCA）、氢钾ATP酶（hydrogen/potassium ATPase）或胃质子泵（gastric proton pump）等。产品内容 碱性液（Reagent A） | 毫升 | 反应液（Reagent B） | 毫升 | 激活液（Reagent C） | 毫升 | 置换液（Reagent D） | 毫升 | 清理液（Reagent E） | 毫升 | 显色液（Reagent F） | 毫升 | 产品说明书 | 1份 |
保存方式 保存反应液（Reagent B）在－20℃冰箱里，避免反复冻融，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月 用户自备 培养箱：用于反应孵育 光学显微镜：用于染色后观察分析 实验步骤 实验开始前，将试剂盒里的反应液（Reagent B）从－20℃的冰箱里取出，放进冰槽里融化，避免光照。然后进行下列操作： - 准备1个6孔细胞培养板
- 放进新鲜切除的动物组织样本（注意：建议组织大小为0.5厘米厚，1厘米长；如果过大，刀切处理一下）
- 将组织压平
- 小心加入xx毫升碱性液（Reagent A），浸没整个组织
- 小心抽去碱性液（Reagent A）
- 小心加入xx毫升反应液（Reagent B），浸没整个组织
- 放进37℃培养箱里，孵育30分钟
- 小心抽去反应液（Reagent B）
- 小心加入xx毫升激活液（Reagent C），浸没整个组织
- 室温下孵育2分钟
- 小心抽去激活液（Reagent C）
- 重复实验步骤9至11二次
二、样本染色处理 - 小心加入xx毫升置换液（Reagent D），浸没整个组织
- 室温下孵育2分钟
- 小心抽去置换液（Reagent D）
- 小心加入xx毫升清理液（Reagent E），浸没整个组织
- 室温下孵育1分钟
- 小心抽去清理液（Reagent E）
- 小心加入xx毫升显色液（Reagent F），浸没整个组织
- 室温下孵育30至60秒；或直至可见棕黑色
- 小心抽去显色液（Reagent F）
- 小心加入xx毫升清理液（Reagent E），浸没整个组织
- 室温下孵育2分钟
- 小心抽去清理液（Reagent E）
- 后续石蜡切片（6微米厚）或冰冻切片（10微米厚）
- 在光学显微镜下观察：酶活性阳性部位呈现深浅不一的棕黑色（如果复染，则细胞核为蓝色）
注意事项 - 本产品为10次操作
- 操作时，须带手套
- 用户根据实际需求，按比例配制试剂用量
- 本产品可以用于鉴定人体肌肉纤维I型和II型：浅染为I型；深染为II型。如果需要进一步鉴定亚型或动物肌肉纤维分型，建议使用ATP酶法冰冻切片人体肌肉组织分型染色试剂盒或ATP酶法冰冻切片动物肌肉组织分型染色试剂盒
- 组织染色注意不要过度
- 显色孵育时间，根据样品和酶活性强弱调整，通常为60秒
- 全组织染色存在其染色不均匀、组织内部染色渗透困难等局限
- 可以使用有机溶剂（乙醇、二甲苯等）脱水、澄清等后续处理
- 本公司提供系列组织细胞酶活性染色试剂产品
质量标准 |
