冰冻切片组织三磷酸腺苷酶活性染色试剂盒

产品说明书
主要用途
冰冻切片组织三磷酸腺苷酶（ATP酶）活性染色试剂是一种旨在使用钙激活技术，在碱性条件下，由三磷酸腺苷酶催化水解产生的磷酸与钙离子结合，经过氯化钴的替换，zui后在硫化铵存在的情况下，呈现组织样本中酶活性部位的棕黑色沉淀现象的而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心改良、成功实验证明的。主要适用于动物组织冰冻切片的酶活性检测。也可用于人体肌肉组织纤维的分型鉴定。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，灵敏牢固，显色清晰。
技术背景
三磷酸腺苷酶或ATP酶（adenosinetriphosphatase；ATPase）可催化ATP水解生成ADP及无机磷的反应，这一反应放出大量能量，用于运送离子进出细胞，同时供给生物体进行需能生命过程。它存在于生物细胞的多个部位，比如细胞质膜上和叶绿体类囊体膜上等，对整个生命的维持有着重要的作用。膜结合ATP酶存在多种形式：钠钾ATP酶、胞膜钙泵ATP酶（plasma membrane calcium ATPase；PMCA）或肌质网/内质网钙泵ATP酶（sarcoplasmic or endoplasmic reticulum calcium ATPases；SERCA）、氢钾ATP酶（hydrogen/potassium ATPase）或胃质子泵（gastric proton pump）等。
产品内容
碱性液（Reagent A） 毫升
反应液（Reagent B） 毫升
激活液（Reagent C） 毫升
置换液（Reagent D） 毫升
清理液（Reagent E） 毫升
显色液（Reagent F） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存反应液（Reagent B）在－20℃冰箱里，避免反复冻融，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月
用户自备
培养箱：用于反应孵育
小型染色缸：用于染色清洗操作
光学显微镜：用于染色后观察分析
1
或
酶法冰冻切片人体肌肉组织分型染色试剂盒
酶法冰冻切片动物肌肉组织分型染色试剂盒
实验步骤
实验开始前，将试剂盒里的反应液（Reagent B）从－20℃的冰箱里取出，放进冰槽里融化，避免光照。然后进行下列操作： 一、 样本激活处理
1．
取出待测的 5 至 10 微米厚的冰冻组织切片（注意：参见注意事项 3 和 4）
2．
小心加上 xx 微升 碱性液（Reagent A）在切片上，铺满整个样品表面 3．
小心移去 碱性液（Reagent A）
4．
小心加上 xx 微升 反应液（Reagent B），铺满整个样品表面 5．
放进 37℃培养箱里，孵育 30 分钟
6．
小心移去 反应液（Reagent B）
7．
小心加上 xx 微升 激活液（Reagent C），铺满整个样品表面 8．
室温下孵育 2 分钟
9．
小心移去
激活液（Reagent C）
10．重复实验步骤 7 至 9 二次
二、样本染色处理
1． 小心加上xx微升置换液（Reagent D），铺满整个样品表面
2． 室温下孵育2分钟
3． 小心移去置换液（Reagent D）
4． 室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent E）中孵育1分钟
5． 小心移去切片上的清理液（Reagent E）
6． 小心加上xx微升显色液（Reagent F），铺满整个样品表面
7． 室温下孵育30至60秒；或直至可见棕黑色
8． 小心移去显色液（Reagent F）
9． 室温下，小心将切片置入xx毫升清理液（Reagent E）中孵育2分钟
10．小心移去切片上的清理液（Reagent E）
三、 （选择步骤）样本复染处理
1． 样本复染处理（苏木素）
2． 放上盖玻片或封片
3． 即刻在一般光学显微镜下观察：酶活性阳性部位呈现深浅不一的棕黑色（如果复染，则细胞核为蓝色）
注意事项
1． 本产品为50次操作
2． 操作时，须带手套
3． 建议组织快速冷冻，避免切片冰晶形成
4． 冰冻切片不可固定处理
5． 试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满样品表面
6． 本产品可以用于鉴定人体肌肉纤维I型和II型：浅染为I型；深染为II型。如果需要进一步鉴定亚型
或动物肌肉纤维分型，建议使用
7． 组织细胞染色注意不要过度
8． 可以使用有机溶剂（乙醇、二甲苯等）脱水、澄清处理后封片
9． 组织细胞染色完成后，即刻进行光学显微镜观察
10．本公司提供系列组织细胞酶活性染色试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定显色清晰