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细胞三磷酸腺苷酶活性染色试剂盒
点击次数:1248 更新时间:2017-01-18

细胞三磷酸腺苷酶活性染色试剂盒

产品说明书(中文版)

 

主要用途

 

细胞三磷酸腺苷酶(ATP酶)活性染色试剂是一种旨在使钙激活技术,在碱性条件下,由三磷酸腺苷酶催化水解产生的磷酸与钙离子结合,经过氯化钴的替换,zui后在硫化铵存在的情况下,呈现细胞样本中酶活性部位的棕黑色沉淀现象的而经典的技术方法。该技术经过精心改良、成功实验证明的。主要适用于各种动物和人体细胞ATP酶的活性检测。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,灵敏牢固,显色清晰。

 

技术背景

三磷酸腺苷酶或ATP酶(adenosinetriphosphatase;ATPase)可催化ATP水解生成ADP及无机磷的反应,这一反应放出大量能量,用于运送离子进出细胞,同时供给生物体进行需能生命过程。它存在于生物细胞的多个部位,比如细胞质膜上叶绿体类囊体膜上,对整个生命的维持有着重要的作用。膜结合ATP酶存在多种形式:钠钾ATP酶、胞膜钙泵ATP酶(plasma membrane calcium ATPase;PMCA)或肌质网/内质网钙泵ATP酶(sarcoplasmic or endoplasmic reticulum calcium ATPases;SERCA)、氢钾ATP酶(hydrogen/potassium ATPase)或胃质子泵(gastric proton pump)等。

产品内容

 

碱性液(Reagent A)

毫升

反应液(Reagent B)

毫升

激活液(Reagent C)

毫升

置换液(Reagent D)

毫升

清理液(Reagent E)

毫升

显色液(Reagent F)

毫升

产品说明书

 1份

 

保存方式

 

保存反应液(Reagent B)在-20℃冰箱里,避免反复冻融,避免光照;其余的保存在4℃冰箱里,有效保证6

 

用户自备

 

苏木素复染试剂盒:用于常规染色后复染

培养箱:用于反应孵育

光学显微镜:用于染色后观察分析

 

 

 

实验步骤

 

实验开始前,将试剂盒里的反应液(Reagent B从-20的冰箱里取出,放进冰槽里融化,避免光照。然后进行下列操作:

 

操作一、25cm2细胞培养瓶染色

 

  • 样本激活处理

 

  • 小心抽去25cm2细胞培养瓶里的培养液
  • 小心加xx毫碱性液(Reagent A铺满整个样品表面
  • 小心抽去碱性液(Reagent A
  • 小心加x毫反应液(Reagent B,铺满整个样品表面
  • 放进37℃培养箱里,孵育30分钟
  • 小心反应液(Reagent B
  • 小心加xx毫激活液(Reagent C),铺满整个样品表面
  • 室温下孵育2分钟
  • 小心 激活液(Reagent C
  • 重复实验步骤79二次

二、样本染色处理

  • 小心加xx毫置换液(Reagent D,铺满整个样品表面
  • 室温下孵育2分钟
  • 小心置换液(Reagent D
  • 小心xx毫升清理液(Reagent E
  • 室温下孵育2分钟
  • 小心清理液(Reagent E
  • 小心加入xx毫显色液(Reagent F,铺满整个样品表面
  • 室温下孵育3060秒;或直至可见棕黑色
  • 小心显色液(Reagent F
  • 小心xx毫升清理液(Reagent E
  • 室温下孵育2分钟
  • 小心清理液(Reagent E

 

  • (选择步骤)样本复染处理

 

  • 样本复染处理(苏木素)
  • 即刻在一般光学显微镜下观察:酶活性阳性部位呈现深浅不一的棕黑色(如果复染,则细胞核为蓝色)

 

 

 

 

操作二、24孔细胞培养板染色

 

  • 样本激活处理

 

  • 小心抽去24孔细胞培养板里的培养液
  • 小心加xx微升碱性液(Reagent A,铺满整个样品表面
  • 小心碱性液(Reagent A
  • 小心加xx微升反应液(Reagent B,铺满整个样品表面
  • 放进37℃培养箱里,孵育30分钟
  • 小心反应液(Reagent B
  • 小心加xx微升激活液(Reagent C),铺满整个样品表面
  • 室温下孵育2分钟
  • 小心激活液(Reagent C
  • 重复实验步骤79二次

二、样本染色处理

  • 小心加xx微升置换液(Reagent D,铺满整个样品表面
  • 室温下孵育2分钟
  • 小心置换液(Reagent D
  • 小心xx微清理液(Reagent E
  • 室温下孵育2分钟
  • 小心清理液(Reagent E
  • 小心加xx微升显色液(Reagent F,铺满整个样品表面
  • 室温下孵育3060秒;或直至可见棕黑色
  • 小心显色液(Reagent F
  • 小心xx微清理液(Reagent E
  • 室温下孵育2分钟
  • 小心清理液(Reagent E

 

  • (选择步骤)样本复染处理

 

  • 样本复染处理(苏木素)
  • 即刻在一般光学显微镜下观察:酶活性阳性部位呈现深浅不一的棕黑色(如果复染,则细胞核为蓝色)

 

注意事项

 

  • 本产品为50次(2个24孔板)或10次(10个25cm2细胞培养瓶)操作
  • 操作时,须带手套
  • 每次更换试剂溶液时,须抽干残留液体
  • 整个操作,在避光状态下进行
  • 细胞染色注意不要过度
  • 避免使用有机溶剂(乙醇、二甲苯等)脱水、澄清处理
  • 细胞染色完成后,即刻进行光学显微镜观察
  • 本产品适合各种规格的培养细胞:载玻片,载玻片培养皿,35mm培养皿,和各种培养孔板,须相应调整试剂溶液:

 

操作容器

建议试剂溶液规格

载玻片

100微升

载玻片培养皿

1毫升

35mm培养皿

1毫升

96孔培养板

100微升

48孔培养板

200微升

24孔培养板

500微升

12孔培养板

1毫升

6孔培养板

2毫升

25cm2细胞培养瓶

3毫升

 

  • 本公司提供系列组织细胞酶活性染色试剂产品

 

质量标准

 

  • 本产品经鉴定性能稳定
  • 本产品经鉴定显色清晰
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