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细胞黑色素(MELANIN)染色试剂盒
点击次数:612 更新时间:2023-05-05

细胞黑色素(MELANIN)染色试剂盒产品说明书

 

主要用途

 

细胞黑色素(MELANIN)染色试剂是一种旨在使银氨溶液产生色沉淀,以分析细胞样品中黑色素成分的而经典的技术方法。该技术经过精心传统Masson-Fontana方法、成功实验证明的。其适用于各种人体和动物细胞样本中的色素成分,尤其是肿瘤细胞的黑色素检测。产品即到即用,操作简捷,性能稳定,着色清晰。 

 

技术背景

 

黑色素(melanin)是一组棕黑色的沉积色素,不含铁而含硫,不溶于水和有机溶剂,能在强碱中长时间后被溶解,被强氧化剂脱色。黑色素与蛋白质结合,形成复合物,通常存在于皮肤、眼睛和大脑黑质(substantia nigra)中。黑色素细胞(melanocytes)产生黑色素,存储在细胞浆的黑色素颗粒中。通过多巴氧化酶(DOPA Oxidase)的作用,使黑色素转化成黑色的多巴黑色素(dopa melanin)。黑色素的显著增加,与黑色素瘤(melanoma1)有关。基于黑色素颗粒,在没有外源性还原剂存在的情况下,具有还原为金属银的特点,运用这一亲银反应(Argentaffin reaction)来检测细胞中的黑色素,是银氨液浸染法(Masson-Fontana)的基本原理。 

 

产品内容

 

清理液(Reagent A)           毫升

固着液(Reagent B)           毫升

染色液(Reagent C             毫升

稀释液(Reagent D)           毫升

平衡液(Reagent E)           毫升

稳定液(Reagent F               毫升

产品说明书              1份

 

保存方式

 

保存在4冰箱里染色液(Reagent C)和稀释液(Reagent D),严格密封瓶口,避免光照;试剂具有腐蚀性,注意操作安全;有效保证6

 

用户自备

 

中性红复染试剂盒(80068):用于常规染色后复染

5毫升玻璃管:用于染色工作液的配制

小型染色缸:用于细胞染色操作

培养箱:用于染色孵育

光学显微镜:用于细胞染色后观察分析

实验步骤

 

操作一:细胞载玻片染色

一、 样本固着处理

 

1. 取出待测的细胞载玻片  

2. 小心加上xx微升清理液(Reagent A在载玻片上,铺满整个样品表面

3. 小心移去载玻片上的清理液(Reagent A

4. 小心加上xx微升固着液(Reagent B在载玻片上,铺满整个样品表面

5. 室温下,孵育10分钟

6. 小心移去载玻片上的固着液(Reagent B

7. 小心加上xx微升清理液(Reagent A在载玻片上清洗样品表面

8. 小心移去载玻片上的清理液(Reagent A

9. 重复实验步骤78一次

二、样本染色处理

1. 移取xx毫升染色液(Reagent C5毫升玻璃管里

2. 使用xx微升枪头一滴一滴加入稀释液(Reagent D先出现混浊,直至溶液澄清,标记为染色工作

3. 小心加上xx微升上述染色工作,铺满整个载玻片样品表面

4. 置于45培养箱里孵育30分钟,或直至载玻片呈现深棕色,避免光照

5. 小心移去载玻片上的染色工作

6. 室温下,小心将载玻片置入xx毫升清理液(Reagent A中孵育2分钟

7. 小心移去载玻片上的清理液(Reagent A

 

三、 样本复染处理

 

1. 小心加上xx微升平衡液(Reagent E在载玻片上,铺满整个样品表面

2. 室温下,孵育3分钟

3. 小心移去载玻片上的平衡液(Reagent E

4. 室温下,小心将载玻片置入xx毫升清理液(Reagent A中孵育2分钟

5. 小心移去载玻片上的清理液(Reagent A

6. 小心加上xx微升稳定液(Reagent F在载玻片上,铺满整个样品表面

7. 室温下,孵育2分钟

8. 小心移去载玻片上的稳定液(Reagent F

9. 室温下,小心将载玻片置入xx毫升清理液(Reagent A中孵育2分钟

10. 小心移去载玻片上的清理液(Reagent A

11. (选择步骤)复染(注意:建议使用中性红复染;中性红复染试剂盒-80068)

12. 透明处理

13. 放上盖玻片或封片

14. 即刻在一般光学显微镜下观察:

色素――

细胞核――红色(复染)

 

操作二:24孔细胞培养板染色

一、样本固着处理

 

1小心抽去24孔细胞培养板里的培养液

2.每孔加入xx微升清理液(Reagent A,清洗生长中的细胞表面

3.小心抽去每孔里的清理液(Reagent A

4.每孔加入xx微升固着液(Reagent B,覆盖整个生长表面

5.在室温下孵育10分钟

6.小心抽去固着液(Reagent B

7.每孔加入xx微升清理液(Reagent A,清洗细胞表面

8.小心抽去清理液(Reagent A

9.重复实验步骤78二次

二、样本染色处理

1. 移取xx毫升染色液(Reagent C5毫升玻璃管里

2. 使用xx微升枪头一滴一滴加入稀释液(Reagent D先出现混浊,直至溶液澄清,标记为染色工作

3. 小心加xx微升上述染色工作,覆盖整个生长表面

4. 置于45培养箱里孵育30分钟,或直至呈现深棕色,避免光照

5. 小心染色工作

6. 小心加入xx微升清理液(Reagent A,清洗细胞表面

7. 室温下孵育2分钟

8. 小心清理液(Reagent A

 

三、 样本复染处理

 

1. 小心加xx微升平衡液(Reagent E,覆盖整个生长表面

2. 室温下,孵育3分钟

3. 小心平衡液(Reagent E

4. 小心加入xx微升清理液(Reagent A,清洗细胞表面

5. 室温下孵育2分钟

6. 小心清理液(Reagent A

7. 小心加xx微升稳定液(Reagent F,覆盖整个生长表面

8. 室温下,孵育2分钟

9. 小心抽去稳定液(Reagent F

10. 小心加入xx微升清理液(Reagent A,清洗细胞表面

11. 室温下孵育2分钟

12. 小心清理液(Reagent A

13. (选择步骤)复染(注意:建议使用中性红复染;中性红复染试剂盒-80068)

14. 即刻在一般光学显微镜下观察:

色素――

细胞核――红色(复染)

 注意事项

 

1. 本产品为50次(细胞载玻片)和25次(124孔板)操作

2. 操作时,须戴手套

3. 稀释液(Reagent D具有腐蚀性和挥发性,严格密封瓶口注意操作安全

4. 加入稀释液(Reagent D时,会出现金褐色浑浊沉淀,直至澄清,切莫过度加入;如果过度加入,使用染色液(Reagent C滴定回来

5. 每次更换试剂溶液时,保持细胞表面基本晾干。空气中晾干状态为没有水滴,呈湿润状态,可见反光

6. 试剂溶液在样品表面时,避免有气泡存在,同时确保铺满细胞表面

7. 反应孵育时间可以延长至1至2小时

8. 样品染色避免过度,肉眼可见红色即可终止染色

9. 建议使用中性红复染试剂盒80068),增加染色对比度

10. 细胞染色完成后,即刻进行光学显微镜观察 

11. 本公司提供系列组织生物化学成分染色分析试剂产品

 

质量标准

 

1. 本产品经鉴定性能稳定

2. 本产品经鉴定显色清晰

 

 


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