细胞黑色素（MELANIN）染色试剂盒产品说明书

主要用途

细胞黑色素（MELANIN）染色试剂是一种旨在使用银氨溶液，产生黑色沉淀，以分析细胞样品中黑色素成分的而经典的技术方法。该技术经过精心传统Masson-Fontana方法、成功实验证明的。其适用于各种人体和动物细胞样本中的黑色素成分，尤其是肿瘤细胞的黑色素检测。产品即到即用，操作简捷，性能稳定，着色清晰。 

技术背景

黑色素（melanin）是一组棕黑色的沉积色素，不含铁而含硫，不溶于水和有机溶剂，能在强碱中长时间后被溶解，被强氧化剂脱色。黑色素与蛋白质结合，形成复合物，通常存在于皮肤、眼睛和大脑黑质（substantia nigra）中。黑色素细胞（melanocytes）产生黑色素，存储在细胞浆的黑色素颗粒中。通过多巴氧化酶（DOPA Oxidase）的作用，使黑色素转化成黑色的多巴黑色素（dopa melanin）。黑色素的显著增加，与黑色素瘤（melanoma1）有关。基于黑色素颗粒，在没有外源性还原剂存在的情况下，具有还原为金属银的特点，运用这一亲银反应（Argentaffin reaction）来检测细胞中的黑色素，是银氨液浸染法（Masson-Fontana）的基本原理。 

产品内容

清理液（Reagent A）           毫升

固着液（Reagent B）           毫升

染色液（Reagent C）             毫升

稀释液（Reagent D）           毫升

平衡液（Reagent E）           毫升

稳定液（Reagent F）               毫升

产品说明书              1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent C）和稀释液（Reagent D），严格密封瓶口，避免光照；试剂具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证6月

用户自备

中性红复染试剂盒（80068）：用于常规染色后复染

5毫升玻璃管：用于染色工作液的配制

小型染色缸：用于细胞染色操作

培养箱：用于染色孵育

光学显微镜：用于细胞染色后观察分析

实验步骤

操作一：细胞载玻片染色

一、 样本固着处理

1． 取出待测的细胞载玻片  

2． 小心加上xx微升清理液（Reagent A）在载玻片上，铺满整个样品表面

3． 小心移去载玻片上的清理液（Reagent A）

4． 小心加上xx微升固着液（Reagent B）在载玻片上，铺满整个样品表面

5． 室温下，孵育10分钟

6． 小心移去载玻片上的固着液（Reagent B）

7． 小心加上xx微升清理液（Reagent A）在载玻片上，清洗样品表面

8． 小心移去载玻片上的清理液（Reagent A）

9． 重复实验步骤7至8一次

二、样本染色处理

1． 移取xx毫升染色液（Reagent C）到5毫升玻璃管里

2． 使用xx微升枪头一滴一滴加入稀释液（Reagent D），先出现混浊，直至溶液澄清，标记为染色工作液

3． 小心加上xx微升上述染色工作液，铺满整个载玻片样品表面

4． 置于45℃培养箱里孵育30分钟，或直至载玻片呈现深棕色，避免光照

5． 小心移去载玻片上的染色工作液

6． 室温下，小心将载玻片置入xx毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟

7． 小心移去载玻片上的清理液（Reagent A）

三、 样本复染处理

1． 小心加上xx微升平衡液（Reagent E）在载玻片上，铺满整个样品表面

2． 室温下，孵育3分钟

3． 小心移去载玻片上的平衡液（Reagent E）

4． 室温下，小心将载玻片置入xx毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟

5． 小心移去载玻片上的清理液（Reagent A）

6． 小心加上xx微升稳定液（Reagent F）在载玻片上，铺满整个样品表面

7． 室温下，孵育2分钟

8． 小心移去载玻片上的稳定液（Reagent F）

9． 室温下，小心将载玻片置入xx毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟

10． 小心移去载玻片上的清理液（Reagent A）

11． （选择步骤）复染（注意：建议使用中性红复染；中性红复染试剂盒-80068）

12． 透明处理

13． 放上盖玻片或封片

14． 即刻在一般光学显微镜下观察：

黑色素――黑色

细胞核――红色（复染）

操作二：24孔细胞培养板染色

一、样本固着处理

1．小心抽去24孔细胞培养板里的培养液

2．每孔加入xx微升清理液（Reagent A），清洗生长中的细胞表面

3．小心抽去每孔里的清理液（Reagent A）

4．每孔加入xx微升固着液（Reagent B），覆盖整个生长表面

5．在室温下孵育10分钟

6．小心抽去固着液（Reagent B）

7．每孔加入xx微升清理液（Reagent A），清洗细胞表面

8．小心抽去清理液（Reagent A）

9．重复实验步骤7和8二次

二、样本染色处理

1． 移取xx毫升染色液（Reagent C）到5毫升玻璃管里

2． 使用xx微升枪头一滴一滴加入稀释液（Reagent D），先出现混浊，直至溶液澄清，标记为染色工作液

3． 小心加入xx微升上述染色工作液，覆盖整个生长表面

4． 置于45℃培养箱里孵育30分钟，或直至呈现深棕色，避免光照

5． 小心抽去染色工作液

6． 小心加入xx微升清理液（Reagent A），清洗细胞表面

7． 室温下孵育2分钟

8． 小心抽去清理液（Reagent A）

三、 样本复染处理

1． 小心加入xx微升平衡液（Reagent E），覆盖整个生长表面

2． 室温下，孵育3分钟

3． 小心抽去平衡液（Reagent E）

4． 小心加入xx微升清理液（Reagent A），清洗细胞表面

5． 室温下孵育2分钟

6． 小心抽去清理液（Reagent A）

7． 小心加入xx微升稳定液（Reagent F），覆盖整个生长表面

8． 室温下，孵育2分钟

9． 小心抽去稳定液（Reagent F）

10． 小心加入xx微升清理液（Reagent A），清洗细胞表面

11． 室温下孵育2分钟

12． 小心抽去清理液（Reagent A）

13． （选择步骤）复染（注意：建议使用中性红复染；中性红复染试剂盒-80068）

14． 即刻在一般光学显微镜下观察：

黑色素――黑色

细胞核――红色（复染）

 注意事项

1． 本产品为50次（细胞载玻片）和25次（1个24孔板）操作

2． 操作时，须戴手套

3． 稀释液（Reagent D）具有腐蚀性和挥发性，严格密封瓶口，注意操作安全

4． 加入稀释液（Reagent D）时，会出现金褐色浑浊沉淀，直至澄清，切莫过度加入；如果过度加入，使用染色液（Reagent C）滴定回来

5． 每次更换试剂溶液时，保持细胞表面基本晾干。空气中晾干状态为没有水滴，呈湿润状态，可见反光

6． 试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满细胞表面

7． 反应孵育时间可以延长至1至2小时

8． 样品染色避免过度，肉眼可见红色即可终止染色

9． 建议使用中性红复染试剂盒（80068），增加染色对比度

10． 细胞染色完成后，即刻进行光学显微镜观察 

11． 本公司提供系列组织生物化学成分染色分析试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定显色清晰