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磷酸酶性比色法定量检测试剂盒说明书
点击次数:338 更新时间:2023-03-22

主要用途

细胞磷酸酶(PTP)活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用特异性合成底物磷酸化肽,PTP去磷酸化后,释放出游离磷酸根,由氨还原产钼蓝显色反应峰值的变化采用比色法测定其峰值的变化,以此进行测算单位酶活性的而经典的技术方法。该技经过精心研制、成功实验证明的其适合于各种细胞裂解悬液样品包括免疫沉淀复合物和粗提或部分纯化酶样品蛋白磷酸化酶活性及其抑制剂的检测。广泛应用于细胞凋亡、蛋白组学、病理生理学、变等研究。产品不含污染性蛋白酶,严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,反应优化,检测敏感。


技术背景


蛋白去磷酸化在于平衡细胞中激酶的作用,调节真核生物中各种不同的细胞生理活动,包括细胞繁殖与分化、分裂、代谢、收缩性、授精、学习和记忆、细胞间交流、细胞形态和迁移、基因转录、mRNA加工、分子运输、胚胎发育、器官发育、组织内环境稳定、免疫功能等。一旦异常,会产生肿瘤和免疫缺陷性疾病。蛋白磷酸酶(protein tyrosine phosphatase;PTP;EC 3.1.3.48)属于磷酸化酶家属中的一员,由一组含有磷酸化(phosphotyrosine)四类酶组成,其功能在于移去蛋白质上磷酸化残基的磷酸基团,实现蛋白质转译后修饰,使之蛋白质之间相互反应和细胞内定位,影响蛋白质的稳定性和活性,成为信号通路和细胞周期控制的主要调节元素,尤其在胰岛素识别、轴突生长、血管生成、免疫反应和炎症反应等发挥重要作用。基于特异性底物磷酸化多肽DADEpYLIPQQG,受到蛋白氨酸酪磷酸酶的去磷酸化作用,释放出游离磷酸根,由氨还原产生钼蓝显色反应后,在分光光度仪下(660nm波长)产生峰值的变化,由此测定磷酸酶的特异活性。\



保存方式


保存裂解液(Reagent B)、缓冲液(Reagent C)、反应液(Reagent E)和显色液(Reagent F)在-20℃冰箱里,避免反复冻融;其余的保存在4℃冰箱里;显色液(Reagent F)具有腐蚀性,避免直接用手接触; 有效保证6月



用户自备

15毫升离心管:用于样品处理的容器

1.5毫升离心管:用于样品处理和保存的容器

细胞刮脱棒:用于贴壁细胞脱离

(微型)台式离心机:用于样品收集

培养箱:用于孵育反应物

比色皿:用于比色的容器

分光光度仪:用于比色分析



注意事项

1. 本产品为25次操作,包括5(点)标准测定

2. 操作时,须戴手套

3. 系统操作过程中,标准曲线测定只需1

4. 显色液(Reagent F具有腐蚀性,避免直接用手接触

5. 样品切忌使用磷酸缓冲液/脱氧胆酸纳SDSEDTAEGTA、巯基乙醇等处理

6. 如果使用免疫沉淀复合物作为待测样品,建议使用通用型蛋白免疫共沉淀(蛋白A树脂)试剂盒-30029.1

7. 比色测定后,比色皿须清洗

8. 如果用户没有660nm波长,可以使用600660nm的任一波长替代

9. 吸光读数增高,表明具有酶活性

10. 建议待测样本蛋白浓度为100微克/20微升;如果样本酶活性过低或过高,则可以增加或降低样本量; (本公司提供 BCA蛋白质浓度定量试剂盒-30031.1

11. 可以使用PTP抑制剂氟化钠NaF)作为抑制剂对照或阴性对照

12. 蛋白氨酸酪磷酸化酶活性单位浓度定义:在30℃下,pH 5.2的情况下,每单位酶在单位时间内(每分钟)释放1微摩尔的磷

13. 本公司提供系列蛋白磷酸酶检测试剂产品




使用承诺

本公司秉着信誉至上、客户满意、质量承诺"的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后,应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系,并将该产品退回,经检验确系产品质量所致,本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致,本公司不承担由此造成的损失。



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