人肺成纤维细胞分离自肺组织；肺是机体的呼吸器官，位于胸腔，左右各 一，覆盖于心之上。肺有分叶，左二右三，共五叶。肺经肺系（指气管、支气管 等）与喉、鼻相连，故称喉为肺之门户，鼻为肺之外窍。成纤维细胞 （Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而 来；成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细 胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱 性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的 互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分 重要的作用。刚分离的肺成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。 30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅 速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大， 细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状； 细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。肺成纤维细胞在生理条件下的主要功能 包括：构造和维持肺器官的正常形态，合成和释放细胞外基质以及组织损伤后及 时大量聚集修复损伤组织。

客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。 1. 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱 和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。 2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。

细胞传代 1) 吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次； 2) 添加0.25%消化液1mL至培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培 养瓶底后，吸出多余消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待 细胞回缩变圆后，再加入5ml培养基终止消化； 3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2-1:3适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的 培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养； 4) 待细胞贴壁后，培养观察；之后每隔2-3天更换新鲜的培养基。

1培养基于4℃条件下可保存3-6个月。

2. 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。 

3. 传代培养过程中，消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。 

4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和 技术部沟通；由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时 和我们联系，详尽告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪、回访直至问 题得到解决。 

5. 该细胞只可用于科研。 

备注：由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同，以上方法仅供各实验室参考