乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase，LDH）试剂盒说明书
微量法
产品内容：
提取液：60mL×1 瓶， 4℃保存；
试剂一：液体5 mL×1 瓶， 4℃保存；
试剂二：粉剂×1 支，-20℃保存，用时加入1.3 mL 双蒸水充分溶解备用，现配现用；
试剂三：液体5 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂四：液体20 mL×1 瓶，4℃保存；
产品简介：
LDH（EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化
丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着NAD+/NADH 之间互变。
LDH 催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯
腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。
试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、
研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样品测定的准备：
1. 细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（104 个）：
提取液体积（mL）为500-1000:1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎
细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次），8000g 4℃离心10min，
取上清，置冰上待测。
2. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1:5-10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL
提取液），进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3. 血清（浆）样品：直接检测。
HL-W-A001
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二、测定操作：
1. 分光光度计预热30min 以上，调节波长至450nm，蒸馏水调零。
2. 样本测定（在EP 管中加入下列试剂）
试剂名称(μL) 测定管对照管
样本10 10
试剂一50 50
试剂二10
蒸馏水10
充分混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴15min
试剂三50 50
充分混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴15min
试剂四150 150
充分混匀，室温静置3min，450 nm 下测定吸光度，计算ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管需要
设一个对照管。
LDH 活力单位计算：
A、用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
1. 标准条件下测定的回归曲线，y = 0.725x (x 为标准品浓度，μmol/mL；y 为对吸光度)。
2. 血清（浆）LDH 活力的计算
单位的定义：每mL 血清（浆）每分钟催化产生1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（U/mL）=ΔA÷0.725÷T×103=92×ΔA
3. 细胞、细菌和组织中LDH 活力的计算
（1） 按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟催化产生1 nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（U/mg prot）=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (V1×Cpr) ÷T×103 =92×ΔA÷Cpr
需要另外测定，建议使用本公司BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
（2） 按样本鲜重计算：
单位的定义：每g 组织每分钟催化产生1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（U/g 鲜重）=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (W ×V1÷V2) ÷T×103 =92×ΔA÷W
（3） 按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1 万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（U/104 cell）= [ΔA÷0.725×V 1]÷(500 ×V1÷V2) ÷T×103 =0.184×ΔA÷W
V1：加入反应体系中样本的体积，0.01 mL；V2：加入提取液的体积，1 mL； T：反应时间，15 min；
Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g; 500：细胞或细菌总数，500 万。103：1μmol/mL=103nmol/mL。
B、用96 孔板测定的计算公式如下：
1、标准条件下测定的回归曲线， y = 0.3625x (x 为标准品浓度，μmol/mL；y 为对吸光度)。
2、血清（浆）LDH 活力的计算
单位的定义：每mL 血清（浆）每分钟催化产生1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（U/mL）=ΔA÷0.3625÷T×103=184×ΔA
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2、细胞、细菌和组织中LDH 活力的计算
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟催化产生1 nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（U/mg prot）=[ΔA÷0.3625×V 1] ÷ (V1×Cpr) ÷T×103 =184×ΔA÷Cpr
需要另外测定，建议使用本公司BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g 组织每分钟催化产生1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（U/g 鲜重）=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (W ×V1÷V2) ÷T×103 =184×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1 万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（U/104 cell）= [ΔA÷0.3625×V 1]÷(500 ×V1÷V2) ÷T×103 =0.368×ΔA÷W
V1：加入反应体系中样本的体积，0.01 mL；V2：加入提取液的体积，1 mL；T：反应时间，15min；
Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g; 500：细胞或细菌总数，500 万。103：1μmol/mL=103nmol/mL。