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超氧化物歧化酶试剂盒
点击次数:1217 发布时间:2022-05-28

超氧化物歧化酶试剂盒
测定意义:
SOD(EC 1.15.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化超氧化物阴离子 发生岐化作用,生成 H2O2 和 O2。SOD 不仅是超氧化物阴离子清除酶,也是 H2O2 主要生成 酶,在生物抗氧化系统中具有重要作用。
测定原理:
通过氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-.),O2-.可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜,后者在 560nm 处有吸收;SOD 可清除 O2-.,从而抑制了甲臜的形成;反应液蓝色越深, 说明 SOD 活性愈低,反之活性越高。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水
试剂的组成和配制:
提取液:60mL×1 瓶,4℃保存; 
试剂一:15mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存,用时加入27ml蒸馏水,充分摇匀悬浊液;
试剂三:液体 175μL×1 支,4℃保存;(与蒸馏水1:1稀释后再使用)
试剂四:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
1、细菌、细胞或组织样品的制备: 细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织, 加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。

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