主要用途

细胞CDK1/CYCLIN B激酶活性光谱法定量检测试剂是一种旨在通过多肽底物，受到CDK1/CYCLIN B磷酸化后，进而由丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶连续循环法反应系统，测定产生ADP过程中，伴随的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）的氧化反应， 即采用光谱法测定其氧化后峰值的变化，以分析细胞裂解样品中CDK1/CYCLIN B特异活性的而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞裂解萃取液样品（动物、人体）、部分或*纯化酶样品中CDK1/CYCLIN B激酶的特异活性定量检测，以及抑制剂和激活剂的筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，高度敏感。

技术背景

细胞周期素依赖性激酶1（cyclin dependent kinase 1；CDK1），又称为细胞分裂周期蛋白2（cell division cycle2；CDC2）或p34cdk1，属于丝氨酸/苏氨酸激酶（serine/threonine protein kinase）家属成员之一。其为高度进化保留的激酶复合物，成熟促进因子（maturation promoting factor；MRF）中的催化亚体，含有297氨基酸，与细胞周期素B结合，允许细胞由G2期进入有丝分裂期以及由G1期进入DNA合成期，达到调节细胞生长、DNA复制、细胞分裂等。其磷酸化目标序列为 GGGRSPGRRRRK。基于底物GGGRSPGRRRRK，在ATP的存在下，受到CDK1/CYCLIN B激酶的磷酸化，获得产物磷酸化多肽，进而通过丙酮酸激酶（pyruvate kinase；PK）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase；LDH）反应系统中，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），其吸光峰值的变化（340nm），来定量分析细胞周期素依赖性激酶1/细胞周期素B的特异活性。

用户自备

CDK1/CYCLIN B激酶：用于抑制剂筛选
1.5毫升离心管：用于样品保存的容器
15毫升锥形离心管：用于样品处理的容器
细胞刮脱棒：用于贴壁细胞脱离
（微型）台式离心机：用于细胞预处理
100微升1厘米光径比色皿或96孔板：用于光度分析操作的容器
分光光度仪或酶标仪：用于样品光度分析

注意事项

1．本产品为25次操作，包括背景操作
2．操作时，须戴手套
3．系统操作过程中，背景测定只需1次
4．样品处理忌用磷酸缓冲溶液 
5．样品须澄清，至关重要 
6．加入样品启动反应后3秒内即刻光谱测定
7．测定值由高到低变化；测定可持续30分钟
8．光谱测定后，比色皿须清洗*
9．样本测定0分钟读数高于5分钟读数表明具有酶活性
10．建议待测样本蛋白浓度为50微克/5微升（本公司提供 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－30030.1） 
11．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
12．可以使用CDK1/CYCLIN B抑制剂（CGP74514A）作为抑制剂对照（IC50＝0.025微摩尔）或阴性对照
13．CDK1/CYCLIN B激酶活性单位浓度定义：在30℃温度下，pH 7.5条件下，每分钟内能够氧化1微摩尔还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）所需的酶量作为一个活性单位
14．本公司提供系列蛋白激酶检测试剂产品
 
质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定检测敏感