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细胞CDK1/CYCLIN B激酶活性光谱法定量检测试剂盒产品说明书
点击次数:1870 发布时间:2017-11-27

主要用途

细胞CDK1/CYCLIN B激酶活性光谱法定量检测试剂是一种旨在通过多肽底物,受到CDK1/CYCLIN B磷酸化后,进而由丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶连续循环法反应系统,测定产生ADP过程中,伴随的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的氧化反应, 即采用光谱法测定其氧化后峰值的变化,以分析细胞裂解样品中CDK1/CYCLIN B特异活性的而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞裂解萃取液样品(动物、人体)、部分或*纯化酶样品中CDK1/CYCLIN B激酶的特异活性定量检测,以及抑制剂和激活剂的筛选。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,高度敏感。

技术背景

细胞周期素依赖性激酶1(cyclin dependent kinase 1;CDK1),又称为细胞分裂周期蛋白2(cell division cycle2;CDC2)或p34cdk1,属于丝氨酸/苏氨酸激酶(serine/threonine protein kinase)家属成员之一。其为高度进化保留的激酶复合物,成熟促进因子(maturation promoting factor;MRF)中的催化亚体,含有297氨基酸,与细胞周期素B结合,允许细胞由G2期进入有丝分裂期以及由G1期进入DNA合成期,达到调节细胞生长、DNA复制、细胞分裂等。其磷酸化目标序列为 GGGRSPGRRRRK。基于底物GGGRSPGRRRRK,在ATP的存在下,受到CDK1/CYCLIN B激酶的磷酸化,获得产物磷酸化多肽,进而通过丙酮酸激酶(pyruvate kinase;PK)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase;LDH)反应系统中,还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide;NADH)转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide;NAD),其吸光峰值的变化(340nm),来定量分析细胞周期素依赖性激酶1/细胞周期素B的特异活性。


用户自备

CDK1/CYCLIN B激酶:用于抑制剂筛选
1.5毫升离心管:用于样品保存的容器
15毫升锥形离心管:用于样品处理的容器
细胞刮脱棒:用于贴壁细胞脱离
(微型)台式离心机:用于细胞预处理
100微升1厘米光径比色皿或96孔板:用于光度分析操作的容器
分光光度仪或酶标仪:用于样品光度分析


注意事项

1.本产品为25次操作,包括背景操作
2.操作时,须戴手套
3.系统操作过程中,背景测定只需1次
4.样品处理忌用磷酸缓冲溶液 
5.样品须澄清,至关重要 
6.加入样品启动反应后3秒内即刻光谱测定
7.测定值由高到低变化;测定可持续30分钟
8.光谱测定后,比色皿须清洗*
9.样本测定0分钟读数高于5分钟读数表明具有酶活性
10.建议待测样本蛋白浓度为50微克/5微升(本公司提供 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒-30030.1) 
11.如果待测样品浓度过高或过低,可以调整样品浓度
12.可以使用CDK1/CYCLIN B抑制剂(CGP74514A)作为抑制剂对照(IC50=0.025微摩尔)或阴性对照
13.CDK1/CYCLIN B激酶活性单位浓度定义:在30℃温度下,pH 7.5条件下,每分钟内能够氧化1微摩尔还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)所需的酶量作为一个活性单位
14.本公司提供系列蛋白激酶检测试剂产品
 
质量标准

1.本产品经鉴定性能稳定
2.本产品经鉴定检测敏感

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