细菌亚硝酸盐还原酶定性检测试剂盒 产品说明书 主要用途 细菌亚硝酸盐还原酶定性检测试剂是一种旨在通过底物亚硝酸盐，在亚硝酸盐还原酶的催化作用下，产生氨或一氧化氮，进而使用使用磺胺酸和N,N-二甲基-1-萘胺，呈现无色反应，来定性分析细菌样品中亚硝酸盐还原酶活性的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细菌样品中亚硝酸盐还原酶活性的定性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，重复性好。 技术背景 亚硝酸盐还原酶（nitrite reductase；NiR）是一类催化亚硝酸盐还原为氨或一氧化氮的还原反应的酶，其分成同化型（assimilatory）和异化型（dissimilatory）亚硝酸还原酶，在生物氮循环进行厌氧能量代谢中起着重要作用。同化型酶以铁氧还原蛋白、FAD、非血红素铁、西罗血红素（siroheme）、NAD（P）H等为电子供体，进行6个电子的还原产生氨（ammonification），包括高等植物、绿藻及蓝藻、粗糙脉孢菌（Neur-ospora crassa）、和大肠埃希氏菌（Escherichia coli）等。异化型酶参与使用亚硝酸氧化有机物质的过程，包括单电子反应生成NO和6个电子的还原产生氨。其脱氮作用是细菌或真菌等获得能量、适应环境生存的生理过程。脱氮细菌、真菌或植物的亚硝酸还原酶有二种：铜型和铁型。铜型（CuNiR）含有类似于铜蓝蛋白（azurin）的铜中心部位，铜蓝蛋白为电子供体；铁型（ccNiR）含有同源双体，包括c型和d1型细胞色素结构域，细胞色素C为电子供体。亚硝酸盐在食品工业中用于色素、调味和防止氧化，还用于蔬菜发酵，但是它具有致畸（tetragenic）和致癌作用（carcinogenic），会引起高铁血红蛋白血症（methemoglobinemia）。基于底物亚硝酸盐（nitrite），通过亚硝酸盐还原酶（nitrite reductase；NiR）的催化作用，而还原为氨或一氧化氮，进而使用磺胺酸（sulfanilic acid）和N,N-二甲基-1-萘胺（N, N dimethyl-1-naphthylamine），呈现无色反应，而对照显示红色，来定性分析亚硝酸盐还原酶的活性。 产品内容 培养液（Reagent A） 毫升 反应液（Reagent B） 毫升 显色液（Reagent C） 毫升 产品说明书 1份 保存方式 保存在4℃冰箱里；显色液（Reagent C）避免光照；反应液（Reagent B）具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证3月 用户自备 15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器 恒温培养箱：用于细菌培养 实验步骤 - 准备好2个15毫升锥形离心管，标记为：背景对照和待测样品
- 分别移取xx毫升培养液（Reagent A）到15毫升锥形离心管
- 接种用户自备的待测细菌样品到待测样品管
- 放进35℃培养箱孵育48小时（注意：少量菌种可以延长孵育至5天）
- 加入xx微升反应液（Reagent B），混匀
- 加入xx微升显色液（Reagent C），混匀
- 观察2分钟
- 结果：
注意事项 - 本产品为20次操作
- Veillonellae、Haemophili、Staphylococci、Corynebacteria、Lactobacilli、Flavobacteria、Fusobacteria、Enterobacteriaceae、Neisseria spp、Leuconostoc等亚硝酸还原酶阳性
- 操作时，须戴手套
- 操作时，严格无菌，避免污染母液
- 反应液（Reagent B）具有腐蚀性，注意操作安全
- 样品中避免含有各种还原性化学物质，包括巯基乙醇（2-mercaptoethanol）、二硫苏糖醇（dithiothreitol；DTT）、维生素C（ascorbic acid）和*（azide）等
- 与背景对照测定显示红色相比，待测样品呈现无色，表明具有酶活性
- 本公司提供系列亚硝酸盐还原酶分析试剂产品
质量标准 |
