组织脂质比色法定量检测试剂盒 产品说明书 主要用途 组织脂质比色法定量检测试剂是一种旨在通过脂溶性偶氮染料油红O特异性地使组织细胞内中性甘油三脂、脂质以及脂蛋白显示红色或深红色,在分光光度仪上进行比色分析,而获得组织样本脂质定量信息的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物和人体组织样本。用于组织成脂细胞定性、组织细胞病理学分析(脂质细胞瘤;LIPOID)等研究。产品严格无菌,即到即用,性能稳定,着色清晰。 技术背景 脂类物质(LIPIDS)是一类脂溶性(疏水性)的自然分子,包括脂肪酸(FATTY ACID)及其衍生物甘油一脂、二脂、三脂和磷脂,以及其它固醇类(STEROL)物质,例如胆固醇。脂类物质在机体中具有能量储存的作用,是膜结构的组成成分和细胞信号分子。油红O(OIL RED O),又称为27号红色溶剂(SOLVENT RED 27)、苏丹红5B(SUDAN RED 5B),是优于氢醇染料溶剂(HYDROALCOHOLIC DYE SOLVENT)的脂溶性偶氮染料(LYSOCHROME DIAZO DYE)。其分子式为XX,分子量为XX。染色显示组织细胞脂类物质呈红色或深红色。在分光光度仪或酶标仪上(520nm波长)可以进行定量分析脂质含量。 产品内容 清理液(Reagent A) XX毫升 裂解液(Reagent B) XX毫升 染色液(Reagent C) XX毫升 溶解液(Reagent D) XX毫升 产品说明书 1份 保存方式 保存染色液(Reagent C)在4℃冰箱里,其余的保存在室温下;试剂具有挥发性,确保瓶盖密闭;染色液(Reagent C),避免光照;有效保证6月 用户自备 15毫升锥形离心管:用于样品处理的容器 1.5毫升离心管:用于样品处理的容器 DOUNCE匀浆器:用于裂解组织 微型台式离心机:用于样品操作 比色皿:用于比色分析的容器 分光光度仪:用于定量检测细胞脂质含量情况 实验步骤 - 手术取出动物组织,并秤重以确定50毫克组织重量
- (选择步骤)放进预冷的15毫升锥形离心管
- (选择步骤)加入XX毫升清理液(Reagent A)清洗1次
- 即刻用刀片切碎组织
- 放进一个预冷的15毫升锥形离心管
- 加入XX毫升预冷的裂解液(Reagent B)
- 涡旋震荡5秒,充分混匀
- 即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器
- 在冰槽里用匀浆棒匀化组织(约20至40下)
- 将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管
- (选择步骤)移取10微升进行蛋白定量检测
- 放进冰槽里待测
- 准备好待测样品,置于冰槽里备用
- 设定好分光光度仪:520nm波长,并置零
- 移取XX微升裂解液(Reagent B)到新的1.5毫升离心管
- 加入XX微升染色液(Reagent C)
- 室温下孵育15分钟,避免光照
- 放进微型台式离心机离心10分钟,速度为10000g
- 小心抽去上清液
- 加入XX毫升裂解液(Reagent B)
- 轻度涡旋震荡
- 放进微型台式离心机离心10分钟,速度为10000g
- 小心抽去上清液
- 重复实验步骤6至9二次
- 加入XX毫升溶解液(Reagent D)
- 轻度涡旋震荡,混匀
- 室温下孵育30分钟,避免光照
- 转移到比色皿
- 即刻放进分光光度仪(520 nm波长):获得背景对照吸光读数(OD)
- 移取100微升上述制备的待测样品到新的1.5毫升离心管
- 加入XX微升染色液(Reagent C)
- 室温下孵育15分钟,避免光照
- 放进微型台式离心机离心10分钟,速度为10000g
- 小心抽去上清液
- 加入XX毫升裂解液(Reagent B)
- 轻度涡旋震荡,混匀颗粒群
- 放进微型台式离心机离心10分钟,速度为10000g
- 小心抽去上清液
- 重复实验步骤6至9二次
- 加入XX毫升溶解液(Reagent D)
- 轻度涡旋震荡,混匀颗粒群
- 室温下孵育30分钟,避免光照
- 转移到比色皿
- 即刻放进分光光度仪(520 nm波长):获得待测样品吸光读数(OD)
- 实际吸光读数(OD):待测样品吸光读数—背景对照吸光读数
- 构建组织样品脂质定量曲线:横座标(x轴)为组织蛋白含量、组织重量、时间点或药物处理浓度等;纵坐标(y轴)为实际样品吸光读数(OD)
注意事项 - 本产品为20次操作
- 操作时须戴手套
- 试剂具有挥发性,务必密封保存
- 染色液(Reagent C)避免-20℃低温保存,否则出现沉淀
- 如果染色液(Reagent C)出现沉淀,须过滤后再使用
- 染色时,避免光照
- 如果没有520nm波长的滤波器,可以使用490nm波长替代
- 本公司提供系列脂质检测试剂产品
质量标准 |