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组织脂质比色法定量检测试剂盒
点击次数:678 更新时间:2017-01-18

组织脂质比色法定量检测试剂盒

产品说明书

 

主要用途

 

组织脂质比色法定量检测试剂是一种旨在通过脂溶性偶氮染料油红O特异性地使组织细胞内中性甘油三脂、脂质以及脂蛋白显示红色或深红色,在分光光度仪上进行比色分析,而获得组织样本脂质定量信息的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物和人体组织样本。用于组织成脂细胞定性、组织细胞病理学分析(脂质细胞瘤;LIPOID)等研究。产品严格无菌,即到即用,性能稳定,着色清晰。

 

技术背景

 

脂类物质(LIPIDS)是一类脂溶性(疏水性)的自然分子,包括脂肪酸(FATTY ACID)及其衍生物甘油一脂、二脂、三脂和磷脂,以及其它固醇类(STEROL)物质,例如胆固醇。脂类物质在机体中具有能量储存的作用,是膜结构的组成成分和细胞信号分子。油红O(OIL RED O),又称为27号红色溶剂(SOLVENT RED 27)、苏丹红5B(SUDAN RED 5B),是优于氢醇染料溶剂(HYDROALCOHOLIC DYE SOLVENT)的脂溶性偶氮染料(LYSOCHROME DIAZO DYE)。其分子式为XX,分子量为XX。染色显示组织细胞脂类物质呈红色或深红色。在分光光度仪或酶标仪上(520nm波长)可以进行定量分析脂质含量。

 

产品内容

 

清理液(Reagent A)    XX毫升

裂解液(Reagent B)  XX毫升

染色液(Reagent C)  XX毫升

溶解液(Reagent D)  XX毫升

产品说明书  1份

 

保存方式

 

保存染色液(Reagent C)在4℃冰箱里,其余的保存在室温下;试剂具有挥发性,确保瓶盖密闭;染色液(Reagent C),避免光照有效保证6月

 

用户自备

 

15毫升锥形离心管:用于样品处理的容器

1.5毫升离心管:用于样品处理的容器

DOUNCE匀浆器:用于裂解组织

微型台式离心机:用于样品操作

比色皿:用于比色分析的容器

分光光度仪:用于定量检测细胞脂质含量情况

 

 

实验步骤

 

  • 样品准备

 

  • 手术取出动物组织,并秤重以确定50毫克组织重量  
  • (选择步骤)放进预冷的15毫升锥形离心管
  • (选择步骤)加入XX毫升清理液(Reagent A)清洗1次
  • 即刻用刀片切碎组织
  • 放进一个预冷的15毫升锥形离心管
  • 加入XX毫升预冷的裂解液(Reagent B)
  • 涡旋震荡5秒,充分混匀
  • 即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器
  • 在冰槽里用匀浆棒匀化组织(约20至40下) 
  • 将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管
  • (选择步骤)移取10微升进行蛋白定量检测
  • 放进冰槽里待测

 

  • 测定准备

 

  • 准备好待测样品,置于冰槽里备用
  • 设定好分光光度仪:520nm波长,并置零

 

  • 背景对照

 

  • 移取XX微升裂解液(Reagent B)到新的1.5毫升离心管
  • 加入XX微升染色液(Reagent C)
  • 室温下孵育15分钟,避免光照
  • 放进微型台式离心机离心10分钟,速度为10000g
  • 小心抽去上清液
  • 加入XX毫升裂解液(Reagent B)
  • 轻度涡旋震荡
  • 放进微型台式离心机离心10分钟,速度为10000g
  • 小心抽去上清液
  • 重复实验步骤6至9二次
  • 加入XX毫升溶解液(Reagent D)
  • 轻度涡旋震荡,混匀
  • 室温下孵育30分钟,避免光照
  • 转移到比色皿
  • 即刻放进分光光度仪(520 nm波长):获得背景对照吸光读数(OD)

 

  • 样品测读

 

  • 移取100微升上述制备的待测样品到新的1.5毫升离心管
  • 加入XX微升染色液(Reagent C)
  • 室温下孵育15分钟,避免光照
  • 放进微型台式离心机离心10分钟,速度为10000g
  • 小心抽去上清液
  • 加入XX毫升裂解液(Reagent B)
  • 轻度涡旋震荡,混匀颗粒群
  • 放进微型台式离心机离心10分钟,速度为10000g
  • 小心抽去上清液
  • 重复实验步骤6至9二次
  • 加入XX毫升溶解液(Reagent D)
  • 轻度涡旋震荡,混匀颗粒群
  • 室温下孵育30分钟,避免光照
  • 转移到比色皿
  • 即刻放进分光光度仪(520 nm波长):获得待测样品吸光读数(OD)
  • 实际吸光读数(OD):待测样品吸光读数—背景对照吸光读数
  • 构建组织样品脂质定量曲线:横座标(x轴)为组织蛋白含量、组织重量、时间点或药物处理浓度等;纵坐标(y轴)为实际样品吸光读数(OD)

  

注意事项

 

  • 本产品为20次操作
  • 操作时须戴手套
  • 试剂具有挥发性,务必密封保存
  • 染色液(Reagent C)避免-20℃低温保存,否则出现沉淀
  • 如果染色液(Reagent C)出现沉淀,须过滤后再使用
  • 染色时,避免光照
  • 如果没有520nm波长的滤波器,可以使用490nm波长替代
  • 本公司提供系列脂质检测试剂产品

 

质量标准

 

  • 本产品经鉴定性能稳定
  • 本产品经鉴定检测敏感
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