3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）活性终点比色法定量检测试剂盒
产品说明书
主要用途
3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）活性终点比色法定量检测试剂是一种旨在通过3-磷酸甘油磷酸激酶和3-
磷酸甘油醛脱氢酶酶偶联反应系统中，伴随的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷（NADH）氧化后峰值的降
低，即采用比色法来测定样品中酶活性的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种细胞、组织、血液等裂解悬液样品3-磷酸甘油醛脱氢酶的总活性检测。产品严格无菌，即到
即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景
3-磷酸甘油醛脱氢酶（Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase；GAPDH；EC1.2.1.12）是一种四聚体的
酶蛋白，参与催化糖酵解，分解葡萄糖分子，为机体提供能量和碳分子。同时具有转录激活、凋亡启动等
功能。3-磷酸甘油醛脱氢酶存在于所有生物体的细胞浆中，而作为看家基因，常用于RNA和蛋白表达分析
的内参标准。通过3-磷酸甘油磷酸激酶（3-phosphoglyceric phosphokinase；3-PGK）和3-磷酸甘油醛脱氢酶
酶偶联反应系统，首先底物3-磷酸甘油（3-phosphoglyceric acid；3-PGA）受到3-磷酸甘油磷酸激酶催化磷
酸化反应，产生1,3-二磷酸甘油（glycerate-1,3-diphosphate）；进而由3-磷酸甘油醛脱氢酶的作用，产生3-磷
酸甘油醛（Glyceraldehyde-3-Phosphate；G-3-P），同时其辅酶因子还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced
nicotinamide adenine dinucleotide；β-NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide
adenine dinucleotide；β-NAD），通过测定吸光值的变化（340nm 波长），来定量分析3-磷酸甘油醛脱氢酶
的总活性。其反应系统为：
产品内容
缓冲液（Reagent A） 毫升
反应液（Reagent B） 微升
底色液（Reagent C） 微升
阴性液（Reagent D） 微升
产品说明书1 份
保存方式
保存在－20℃冰箱里，反应液（Reagent B）和底色液（Reagent C）避免光照；有效保证6 月
用户自备
酶标板：用于比色的容器
酶标仪：用于样品比色分析
2
实验步骤
一、测定准备
1． 开启并设定好分光光度仪（温度为25℃）：波长340nm，并置零
2． 从－20℃冰箱里取出试剂，置于冰槽里融化；底色液（Reagent C）避免光照
3． 缓冲液（Reagent A）室温下均衡温度
二、活性测定
1． 在96 孔酶标板上做好相应标记：背景对照和样品
2． 分别移取xx 微升缓冲液（Reagent A）到96 孔板中
3． 分别加入xx 微升反应液（Reagent B）
4． 分别加入xx 微升底色液（Reagent C）
5． 轻轻摇动96 孔酶标板
6． 在25℃温度下孵育3 分钟
7． 分别加入xx 微升阴性液（Reagent D）或待测样品（20 微克蛋白）到相应孔中（注意：样品须清澈）
8． 轻轻摇动酶标板
9． 在25℃温度下孵育10 分钟
10．即刻放进酶标仪检测
11．活性计算
注意事项
1． 本产品为50 次操作，包括背景对照
2． 操作时，须戴手套
3． 系统操作过程中，背景测定只需1 次
4． 样品须澄清，至关重要
5． 孵育完成后即刻比色测定
6． 测定值由低到高变化；测定持续10 分钟
7． 比色测定后，比色皿须清洗*
8． 建议待测样本蛋白浓度为20 微克/5 微升
9． 如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
10．葡萄糖-6-磷酸脱氢酶单位活性定义为：在25℃，pH 7.6 条件下，每分钟内能够转化1 微摩尔3-磷酸甘
油至3-磷酸甘油醛所需的酶量作为一个活性单位
11．本公司提供系列医学生化经典分析试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测敏感