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3-磷酸甘油醛脱氢酶活性终点比色法定量检测试剂盒
点击次数:778 更新时间:2017-01-18

3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)活性终点比色法定量检测试剂盒
产品说明书
主要用途
3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)活性终点比色法定量检测试剂是一种旨在通过3-磷酸甘油磷酸激酶和3-
磷酸甘油醛脱氢酶酶偶联反应系统中,伴随的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷(NADH)氧化后峰值的降
低,即采用比色法来测定样品中酶活性的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种细胞、组织、血液等裂解悬液样品3-磷酸甘油醛脱氢酶的总活性检测。产品严格无菌,即到
即用,操作简捷,性能稳定。
技术背景
3-磷酸甘油醛脱氢酶(Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase;GAPDH;EC1.2.1.12)是一种四聚体的
酶蛋白,参与催化糖酵解,分解葡萄糖分子,为机体提供能量和碳分子。同时具有转录激活、凋亡启动等
功能。3-磷酸甘油醛脱氢酶存在于所有生物体的细胞浆中,而作为看家基因,常用于RNA和蛋白表达分析
的内参标准。通过3-磷酸甘油磷酸激酶(3-phosphoglyceric phosphokinase;3-PGK)和3-磷酸甘油醛脱氢酶
酶偶联反应系统,首先底物3-磷酸甘油(3-phosphoglyceric acid;3-PGA)受到3-磷酸甘油磷酸激酶催化磷
酸化反应,产生1,3-二磷酸甘油(glycerate-1,3-diphosphate);进而由3-磷酸甘油醛脱氢酶的作用,产生3-磷
酸甘油醛(Glyceraldehyde-3-Phosphate;G-3-P),同时其辅酶因子还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced
nicotinamide adenine dinucleotide;β-NADH)转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced nicotinamide
adenine dinucleotide;β-NAD),通过测定吸光值的变化(340nm 波长),来定量分析3-磷酸甘油醛脱氢酶
的总活性。其反应系统为:
产品内容
缓冲液(Reagent A) 毫升
反应液(Reagent B) 微升
底色液(Reagent C) 微升
阴性液(Reagent D) 微升
产品说明书1 份
保存方式
保存在-20℃冰箱里,反应液(Reagent B)和底色液(Reagent C)避免光照;有效保证6 月
用户自备
酶标板:用于比色的容器
酶标仪:用于样品比色分析
2
实验步骤
一、测定准备
1. 开启并设定好分光光度仪(温度为25℃):波长340nm,并置零
2. 从-20℃冰箱里取出试剂,置于冰槽里融化;底色液(Reagent C)避免光照
3. 缓冲液(Reagent A)室温下均衡温度
二、活性测定
1. 在96 孔酶标板上做好相应标记:背景对照和样品
2. 分别移取xx 微升缓冲液(Reagent A)到96 孔板中
3. 分别加入xx 微升反应液(Reagent B)
4. 分别加入xx 微升底色液(Reagent C)
5. 轻轻摇动96 孔酶标板
6. 在25℃温度下孵育3 分钟
7. 分别加入xx 微升阴性液(Reagent D)或待测样品(20 微克蛋白)到相应孔中(注意:样品须清澈)
8. 轻轻摇动酶标板
9. 在25℃温度下孵育10 分钟
10.即刻放进酶标仪检测
11.活性计算
注意事项
1. 本产品为50 次操作,包括背景对照
2. 操作时,须戴手套
3. 系统操作过程中,背景测定只需1 次
4. 样品须澄清,至关重要
5. 孵育完成后即刻比色测定
6. 测定值由低到高变化;测定持续10 分钟
7. 比色测定后,比色皿须清洗*
8. 建议待测样本蛋白浓度为20 微克/5 微升
9. 如果待测样品浓度过高或过低,可以调整样品浓度
10.葡萄糖-6-磷酸脱氢酶单位活性定义为:在25℃,pH 7.6 条件下,每分钟内能够转化1 微摩尔3-磷酸甘
油至3-磷酸甘油醛所需的酶量作为一个活性单位
11.本公司提供系列医学生化经典分析试剂产品
质量标准
1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定检测敏感

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