石蜡切片神经组织金属锌蒂姆（TIMM）染色试剂盒

产品说明书
主要用途
石蜡切片神经组织金属锌蒂姆（TIMM）染色试剂是一种旨在使用标准化的化学分离石蜡方法和蒂姆硫化
法银染技术，分析存档中的石蜡包埋的组织切片中神经系统中含锌神经细胞结构的而经典的技术方法。
该技术经过精心改良蒂姆（Timm）方法、成功实验证明的。主要适用于石蜡包埋的脑组织或外周神经组织
切片，例如海马（hippocampus）中苔藓纤维区（mossy fiber region）和齿状分子层（dentate molecular layer）
等含锌神经细胞体，例如锥体细胞（pyramidal cells）、齿状颗粒细胞（dentate granule cells）等检测。广泛
用于脑神经病理生理，尤其是癫痫等疾病的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色
清晰。
技术背景
蒂姆硫化法银染（Timm’s sulfide silver staining）是由蒂姆建立的用于观察脑组织和其它组织中（例如胰腺、
小肠、肾脏等）微量金属元素锌，以及其它重金属元素，例如铜、镍、钴和铁等的染色技术。主要
用于观察中枢神经系统中含锌神经元，以及新轴突分枝（sprouted axon）和轴突终端（axon terminal）等结
构，分析大脑灰质内部的海马中轴突终端（突触泡囊synaptic vesicle）、苔藓终端（齿状颗粒细胞dentate
granule cells）中的反应性锌的分布，与突触活性和膜去极化的关系，研究神经退行性和癫痫病理性变化机
制。其原理在于使用硫化物，与组织中的游离金属元素反应成为不溶性复合物沉积，进而在还原剂的作用
下，金属硫化物催化还原离子银为可见金属银沉积，呈现黑色，即为金属自显影术（autometallography，
AMG）。
产品内容
硫化液（Reagent A） 毫升
固着液A（Reagent B） 毫升
固着液B（Reagent C） 毫升
脱蜡液（Reagent D） 毫升
补水液A（Reagent E） 毫升
补水液B（Reagent F） 毫升
补水液C（Reagent G） 毫升
清理液（Reagent H） 毫升
染色液A（Reagent I） 毫升
染色液B（Reagent J） 微升
产品说明书1 份
保存方式
保存在4℃冰箱里，避免光照；脱蜡液（Reagent D）容易挥发，注意密闭瓶盖；有效保证3 月
用户自备
500
200
200
300
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100
5
150
2
PBS 缓冲液：用于灌注
无离子水：用于组织清洗
1.5 毫升离心管：用于工作液配制的容器
无菌镊子：用于转移动物脑组织
小型玻璃染色缸：用于组织或切片处理的容器
切片机：用于组织切片
明胶化载玻片和盖玻片：用于切片后铺片
中性树脂：用于切片封片
光学显微镜：用于切片染色后观察分析
实验步骤
一、样本固着处理
1． 常规麻醉动物和手术（建议：使用PBS 由心脏处灌注约5 至10 分钟，去除血液直至澄清，肝脏显示
灰白）
2． 使用适量的硫化液（Reagent A）灌注处理（建议：至少10 分钟，肝脏显示发黑）
3． 即刻小心取出脑组织（组织显示蓝灰色调）
4． 小心放进20 毫升硫化液（Reagent A）里
5． 室温下浸泡孵育45 分钟
6． 即刻用无菌镊子夹起组织块
7． 放进用户自备的无离子水清洗2 分钟
8． 小心转移到20 毫升固着液A（Reagent B）里
9． 室温下浸泡孵育过夜（16 小时）
10．小心转移到20 毫升固着液B（Reagent C）里
11．室温下浸泡孵育过夜（16 小时）
12．用绵纸吸干组织快
13．即刻进行常规乙醇和氯甲烷处理后石蜡包埋
14．取出组织块，进行缓慢石蜡切片，为10 至50 微米厚，并铺片在明胶化载玻片上
二、脱蜡处理
1． 取出10 片待测的10 至50 微米厚的石蜡包埋的组织切片
2． 按下表依次放进小染色缸里孵育
染色缸孵育时间
50 毫升脱蜡液（Reagent D） 15 分钟
50 毫升脱蜡液（Reagent D） 15 分钟
50 毫升脱蜡液（Reagent D） 15 分钟
3
50 毫升补水液A（Reagent E） 3 分钟
50 毫升补水液B（Reagent F） 3 分钟
50 毫升补水液C（Reagent G） 3 分钟
50 毫升清理液（Reagent H） 3 分钟
5． 小心移去切片上的清理液（Reagent H）
三、样本染色处理
染色开始前，取出染色液A（Reagent I）置于室温下预热，然后移取1 毫升染色液A（Reagent I）到1.5
毫升离心管，加入25 微升染色液B（Reagent J），混匀后，标记为染色工作液，置于暗室里备用。然后进
行下列操作
1． 小心加上200微升染色工作液，铺满整个切片样品表面
2． 室温下孵育60 至90 分钟，或直至呈现黑色，即可终止，避免光照
3． 小心移去切片上的染色工作液
4． 室温下，小心将切片置入50 毫升清理液（Reagent H）中孵育5 分钟
5． 小心移去切片上的清理液（Reagent H）
6． （选择步骤）进行复染操作（建议使用甲苯酚紫（CRESYL VIOLET）复染试剂盒）
7． 透明处理
8． 放上盖玻片或封片（中性树脂）
9． 即刻在一般光学显微镜下观察：含锌神经细胞体，例如锥体细胞、齿状颗粒细胞、突触泡囊等，呈现
黑色（如果复染――细胞核呈现蓝色，胞浆尼氏（体）物质呈现粉红至紫色）
注意事项
1． 本产品为10 次操作，其中20 次染色操作
2． 操作时，须戴手套
3． 铺片须使用明胶化载玻片，否则染色会掉片：*用毛笔涂刷；第二保持湿润3 小时；第三用PARAFIN
包裹后压片
4． 切片建议10 至50 微米，过厚和过薄不利于检测神经细胞
5． 注意操作安全，尤其使用固着液（Reagent B 和C）和脱蜡液（Reagent D）
6． 建议使用玻璃染色缸
7． 每次更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干
8． 试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面
9． 整个操作，在避光状态下进行
10．染色完成后，即刻进行光学显微镜观察
11．样品染色后保存，避免光照
12．参考图像如下
13．本公司提供系列神经系统成分染色试剂产品
4
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定显色清晰