酵母双杂交系统细胞转化试剂盒 产品说明书 主要用途 酵母双杂交系统细胞转化试剂是一种旨在通过化学处理和物理热休克技术，快速制备酵母感受态细胞和同步转化两种特定构建的目标质粒DNA的而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种实验用酵母菌株和酵母质粒。应用于酵母双杂交系统和其它蛋白筛选检测等。产品即到即用，性能稳定，操作简便，转化效率平均高达105转化细胞/微克DNA。 技术背景 酵母菌是一种低等单细胞真核生物，具有细胞生长快，易于培养，遗传操作简单明了等原核生物的特点。作为模式生物，它具有比较完备的基因表达调控机制和表达产物的加工修饰能力，在分子遗传学方面认识zui早，zui先作为外源基因表达的细胞宿主。它是一种哺乳动物基因调节的理想研究工具。其中酵母双杂交系统（yeast two-hybrid assay）是一种研究蛋白质之间相互作用或遗传筛选的实验工具，通过同步转化两种特定构建的目标载体（表达载体）包括结合载体—即“饵”载体（bait plasmid），和激活载体—即“捕”载体（hunter plasmid）或报告载体或基因分子库载体，到同一感受态酵母细胞，通过氨基酸缺陷型培养基的选择性培养和报告基因的检测，来分析不同蛋白之间的相互作用和功能。 产品内容 清理液（Reagent A） | 毫升 | 感化液（Reagent B） | 毫升 | 转化液（Reagent C） | 毫升 | 强化液（Reagent D） | 毫升 | 培养液（Reagent E） | 毫升 | 说明书 | 1份 |
保存方式 保存强化液（Reagent D）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月 用户自备 质粒：用于转化的目标DNA片段 15毫升锥形离心管：用于酵母细胞收集的容器 台式离心机：用于酵母细胞沉淀 涡旋震荡仪：用于混匀反应物 摇床：用于酵母细胞孵育 恒温水槽：用于孵育反应物 琼脂平板：用于转化后酵母细胞筛选 实验步骤 1． 准备好10毫升过夜生长的新鲜酵母细胞，例如AH109菌株（OD600＝1至2；1 X 107细胞/毫升） 2． 移入到15毫升锥形离心管 3． 放进台式离心机离心5分钟，速度为3500g 4． 小心抽掉上清液 5． 加xx毫升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群 6． 放进台式离心机离心5分钟，速度为3500g 7． 小心抽掉上清液 8． 加入xx毫升感化液（Reagent B），混匀细胞颗粒群 9． 放进台式离心机离心5分钟，速度为3500g 10．小心抽掉上清液 11．加入xx毫升感化液（Reagent B），混匀细胞颗粒群 12．放进30℃摇床孵育60分钟，速度为100RPM 13．放进台式离心机离心5分钟，速度为3500g 14．小心抽掉上清液 15．加入xx毫升感化液（Reagent B），混匀细胞颗粒群 16．移取300微升到新的预冷的15毫升锥形离心管，其余的保存在4℃冰箱里备用 17．加入xx微升强化液（Reagent D） 18．加入10微升用户自备的“饵”载体DNA（总量为5微克） 19．加入10微升用户自备的“捕”载体或基因分子库载体DNA（总量为2.5微克） 20．涡旋震荡15秒 21．加入xx毫升转化液（Reagent C） 22．涡旋震荡15秒 23．放进30℃摇床孵育45分钟，速度为100RPM 24．放进42℃恒温水槽孵育20分钟，期间每隔5分钟，轻度涡旋震荡5秒 25．放进台式离心机离心5分钟，速度为3500g 26．小心抽掉上清液 27．加入xx毫升培养液（Reagent E），混匀 28．（选择步骤）放进30℃恒温摇床孵育1小时，速度为220RPM 29．分别移取50微升均匀铺板在选择性培养基的琼脂平板上（注意：用户可以适量稀释后铺板） 30．室温下静置30分钟 31．倒置琼脂平板 32．放进30℃培养箱孵育2至8天，直至菌落出现 33．（选择步骤）计算转化效率（转化细胞/微克DNA） 【菌落数X 5（毫升；转化菌液总量）】÷【0.05（毫升；菌液铺板容量）X 稀释倍数 X 5（微克；DNA量）】 注意事项 1． 本产品为20次（10毫升菌液）操作 2． 操作时须戴手套 3． 确保起始酵母菌量 4． 使用感化液（Reagent B）处理过的酵母细胞可以保存在4ºC冰箱2周 5． 如果转化不同规格的酵母，可按比例调整使用试剂用量 2 6． 本产品适用于各种酵母菌株的转化，注意选择适当的培养基；建议使用本公司系列酵母培养基 7． 建议使用高质纯化的DNA用于转化，确保转化效率 8． 本产品转化效率可达104－106细胞/微克DNA 9． 本公司提供系列酵母转化实验技术产品 质量标准 1． 本产品经鉴定性能稳定 2． 本产品经鉴定转化效率高 |
