一、测定原理：

谷丙转氨酶 (ALT) 在 37℃及 PH7.4 条件下，作用于及α-酮戊二酸组成的底物，生成丙酮酸及。反应 30min 后 (固定时间) 加入 肼 (DNPH) 盐酸溶 液，既中止反应， 同时 DNPH 与酮酸中羰基加成，生成丙酮 酸苯腙。苯腙在碱性条件下呈红棕色，于 505nm 比读吸光度 并计算酶活力。

二、试剂的组成与配制：(96T)

试剂一:谷丙转氨酶基质液,5mL×1 瓶，4℃冰箱保存 6 个月； 试剂二肼液,5mL×1 瓶，4℃冰箱保存 6 个月； 试剂三:4mol/L 氢氧化钠液,5mL×1 瓶，室温密封保存 6 个月； 0.4mol/L 氢氧化钠液的配制, 临用时按 4mol/L 氢氧化钠液:双

蒸水=1 ∶9 的比例稀释，需多少配多少，室温密封保存。 试剂四:2mol/mL 丙酮酸钠标准液×1 支，4℃冰箱保存 6 个月； 试剂五:0. 1mol/L 磷酸盐缓冲液×1 支，4℃冰箱保存 6 个月。

三、操作过程：

1 、样本前处理:

①、血清 (浆) 及其它液体样本待测：直接测定。

② 、动物组织样本：准确称取组织重量，按重量 (g) ：体积 (mL)=1:9 的比例，加入 9 倍体积的生理盐水，冰水浴条件 下机械匀浆，2500 转/分，离心 10 分钟，取上清液待测。

③ 、培养细胞样本前处理：将收集好的细胞用等渗缓冲液 (推 荐 0.1mol/L pH7~7.4 磷酸盐缓冲液或生理盐水) 清洗 1~

2 次；1000 转/分,离心 10 分钟,弃上清, 留细胞沉淀，加入匀 浆介质 (推荐加入 0.1mol/L    pH7~7.4 磷酸盐缓冲液或生 理盐水) ，冰水浴条件

1 、比色法中常用的有赖氏 (Reitman-Frankel) 法及金氏 (King) 法。赖氏法标准曲线所定单位数，是用实验方法和卡门氏分 光  光度法 (速率法) 作对比测定求得的。 以卡门氏单位报 告结果，比较准确。

卡门氏单位定义：1mL 液体，反应液总容量 3mL ，波长 340nm， 1cm 光径，25℃ ，1min 内所生成的丙酮酸，使 NADH 氧化 成 NAD+而引起吸光度每下降 0.001 为一个单位 ( 1 卡门氏 单位=0.482 U/L ，25℃) 。

2 、一般血清标本内源性酮酸很少，血清对照孔吸光度值接近试 剂空白孔 (以双蒸水代替血清，其他和对照孔同样操作) 。 所以，成批标本测定时，一般不需要每一标本都作本身血清 对照孔， 以试剂空白孔代替即可，但对脂血、黄疸或溶血血 清，每份标本应作对照孔。

3 、酶活力超过 150 卡门氏单位时，用生理盐水稀释血清后重测。

4 、应将一般血清的对照孔 (或称标本空白孔) 的吸光度作为日 常质控的指标之一；如相差大，可考虑α-酮戊二酸浓度、DNPH 浓度及仪器等原因引起。

5 、血清中ALT 在室温 (25℃) 可保存 2 天，在 0~4℃可保存一 周，在-25℃可保存 1 个月。