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细菌核糖体分离试剂盒说明书
点击次数:77 发布时间:2022-12-13

细菌核糖体(ribosome)分离试剂盒产品说明书

 

主要用途

 

细菌核糖体ribosome分离试剂是一种旨在通过化学破膜以及差速超速离心处理方法,分离出完整而纯化的70S核糖体组分的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种培养或临床细菌菌株核糖体成分的分离产品即到即用,操作简易,性能稳定,无核酶和蛋白酶污染,萃取纯度和产量皆高。 

 

技术背景

 

核糖体(ribosome)是一种细小颗粒的核糖蛋白复合物(ribonucleoprotein complex),生命细胞制造蛋白质的非膜性结构元素和转译装置(translational apparatus),由RNA和蛋白质组成,具有多肽转移酶的活性,刺激RNA合成,并调节RNA、核糖体自身以及蛋白质的生物合成。其分成2个亚体:大亚体和小亚体。核糖体通过大亚体结合转运核糖体(tRNA),而小亚体结合信使RNAmRNA),然后阅读RNA提供的信息,转译(translation)成氨基酸,连接成蛋白分子。真核生物的核糖体位于胞浆(游离核糖体)、线粒体和叶绿体中。其中胞浆核糖体为80S核糖体,由40S小亚体和60S大亚体组成:60S5S RNA28S RNA5.8S亚基和49个蛋白组成;而40S18S RNA33个蛋白组成。线粒体和叶绿体核糖体与原核生物相似,为70S核糖体,由30S小亚体和50S大亚体组成:50S包括5S23S RNA34个蛋白;30S包括16S RNA21个蛋白。细菌核糖体成为抗菌药物的靶标,其中50%以上抗菌素针对细菌核糖体。同时核糖体高度进化保留,成为种系分类(phylogenetic classification)的分子标志。   

 

产品内容

 

裂解液(Reagent A           毫升

保存液(Reagent B           毫升

产品说明书              1份

 

保存方式

 

保存在-20℃冰箱里,有效保证6

 

用户自备

 

50毫升锥形离心管:用于样品操作的容器

1.5毫升离心管:用于样品操作和保存的容器

台式离心机:用于样品操作

超速离心机:用于样品操作

超声仪:用于裂解细胞

涡旋震荡仪:用于混匀

 

 

实验步骤

 

实验开始前,将试剂盒里的试剂置于冰槽里冻融备用。然后进行下列操作。

 

1. 准备50毫升细菌(OD600=0.2108细胞/毫升)

2. 转移到50毫升锥形离心管

3. 台式离心机离心30分钟,速度为3000g

4. 小心抽去上清液

5. 加入预冷的xx毫升裂解液Reagent A

6. 涡旋震荡15秒,充分混匀

7. 超声处理100瓦功率,20秒一次重复4

8. 置于冰槽里孵育30分钟,期间每隔5分钟涡旋震荡15

9. 放进4台式离心机离心15分钟,速度为15000g

10. 小心移取上清液到新的高速离心管

11. 放进超速离心机离心15分钟,速度为30000g

12. 小心移取上清液到新的高速离心管(注意:可以使用矿物油填满离心管)

13. 放进4超速离心机离心2小时,速度为100000g

14. 小心取出离心管 

15. 小心抽去上清液

16. 加入500微升或xx毫升保存液(Reagent B,混匀颗粒群

17. 转移到新的1.5毫升离心管

18. (选择步骤)进行核糖体定量测定 

19. 放进-70冰箱里保存或置于冰槽里准备后续操作

 

注意事项

 

1. 本产品为20次操作(5 X 109细胞/  

2. 建议使用足够的细

3. 样品操作均须在4或以下状态下进行

4. 操作时,须无菌操作,避免污染母液

5. 核糖体定量计算公式(微克/微升): A260 ¸ 11.1

6. 如果进行核糖体蛋白萃取,建议使用纯化核糖体蛋白质萃取试剂盒HL16041

7. 本公司提供系列核糖体分析技术产品

 

质量标准

 

1. 本产品经鉴定性能稳定

2. 本产品经鉴定分离的核糖体维持正常活性

3. 本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶



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