24小时服务热线

18918128223
网站首页  |  公司介绍  |  产品展示  |  公司新闻  |  资料下载  |  技术文章  |  在线咨询  |  联系我们
产品搜索
产品目录
ELISA试剂盒
标准品
培养基
检测试剂盒
细胞株
点击量多的产品
·
  技术文章 首页 >> 技术文章
乳酸脱氢酶(LDH)释放法细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒解决方案
点击次数:227 发布时间:2022-08-25

主要用途 乳酸脱氢酶(LDH)释放法细胞繁殖与毒性定量检测试剂是一种旨在通过酶联连续反应系统检测由于细胞损 伤导致的细胞内稳定的乳酸脱氢酶释放到细胞外,使四唑盐染料碘硝基氯化四氮唑(INT)还原为红色甲臜 farmazan),即比色法定量测定酶活性,以评价活体细胞繁殖的而经典的技术方法。该技术经过精心 研制、成功实验证明的。适用于各种药物、化学、环境因子和营养因子处理的贴壁或悬浮生长中的动物或人 体细胞。替代传统的同位素[51 Cr]释放检测的。产品严格无菌,即到即用,简捷敏感,性能稳定, 显色清晰,检测准确,重复性好。


技术背景 细胞凋亡或坏死而造成的细胞膜结构的损害或*裂解导致细胞浆内的酶释放外泄到培养液里,其中包括活 性稳定的乳酸脱氢酶。乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenaseLDH)释放法的测定是基于在乳酸脱氢酶的作用 下,还原NAD+反应生成的NADH,再与氧化型2-4-碘苯)-3-4-硝基苯)-5-苯四唑(IodonitrotetrazoliumINT)在硫辛酰胺脱氢酶(diaphorase)的催化下反应生成红色生色产物甲臜(formazan),在490nm波长下产 生吸收峰,从而确定释放的乳酸脱氢酶的活性,作为细胞膜完整性的标志:吸光值与细胞死亡或毒性程度成 线性正相关。酶联连续反应系统为:


悬浮细胞检测 1. 准备 96 孔细胞培养板的待测悬浮细胞(每孔 100 微升):包括未处理的对照细胞(样品对照孔),未处 理的后续裂解的细胞(样品最大酶活性对照孔),以及药物处理的细胞(处理样品孔),并做好标记(细 胞密度为每孔 5 X 103 5 X 104细胞) 

2. 到规定的检测时间点前 1 小时,从湿润的细胞培养箱里取出待测的 96 孔细胞培养板(注意:确保细胞培 养液维持在 100 微升容量) 

3. 加入 xx 微升裂解液(Reagent A到未处理的后续裂解的细胞孔里(样品最大酶活性对照孔) 

4. 同时加入 xx 微升补充液(Reagent B到其余所有检测孔里 

5. 放回湿润的细胞培养箱里,继续培养 1 小时,即规定检测时间 

6. 从湿润的细胞培养箱里取出待测的 96 孔细胞培养板 

7. 放进孔板离心机离心 10 分钟,速度为 250g

8. 分别小心移取 50 微升上清液到新的 96 孔板的相应孔里,避免触摸细胞颗粒,同时注意做好标记 

9. 分别加入 xx 微升反应液(Reagent C(注意:使用前,须混匀) 210.分别加入 xx 微升显色液(Reagent D) 

11.摇动 96 孔板混匀 

12.在 30℃温度下孵育 30 分钟,避免光照 

13.(选择步骤)分别加入 xx 微升终止液(Reagent E) 

14.即刻放进酶标仪里测读:波长 490nm 

15.计算处理样品实际吸光读数:处理样品孔吸光读数-样品对照孔吸光读数 

16.计算样品细胞最大酶活性的实际吸光读数:样品最大酶活性对照孔吸光读数-样品对照孔吸光读数) 

17.计算细胞毒性或死亡率(%): (处理样品实际吸光读数÷样品细胞最大酶活性的实际吸光读数)X 100 

18.或绘制细胞生长曲线:纵座标(Y 轴)为实际吸光读数(A);横坐标(X 轴)为细胞数或时间点或药物 浓度;据此计算其 LD50

上一章:组织γ分泌酶活性荧光共振能量转移法定量检测试剂盒说明书 下一章:动物(羊)精子细胞冻存液产品说明书
推荐产品
·小鼠c-fos ELISA试剂盒价格
·小鼠还原型谷胱甘肽(GSH)ELISA试剂盒价格
·小鼠氧化型谷胱甘肽(GSSG)ELISA试剂盒价格
·小鼠解整合素样金属蛋白酶9(ADAM9)ELISA试剂盒价格
·小鼠钥孔虫戚血蓝蛋白(KLH)ELISA试剂盒价格
·小鼠抗核抗体(ANA)ELISA试剂盒价格
最新产品
·脂质组学全定量服务
·靶标定量服务
·固相微萃取服务
·靶标代谢组学服务
·cirRNA测序服务
·miRNA测序服务
·lncRNA测序服务
·mRNA测序服务
较早新闻
·备货通知函
·配制只需三分钟,快来申请试用片剂PBS吧
·ELISA试剂盒实验操作技巧
·小心买到ELISA试剂盒假货
·放 假 通 知
·上海哈灵生物专家对ELISA试剂盒的评价
较早技术文章
·细胞骨架(肌动蛋白微丝;F-ACTIN)绿色荧光染色试剂盒
·石蜡切片脂质油红O间接染色试剂盒
·活体细胞溶酶体膜通透性(LMP)/完整性吖啶橙荧光检测流程
·细胞内质网内钙离子浓度荧光检测试剂盒
·冰冻切片总胆固醇(酯酶法)菲律宾)荧光染色试剂盒
·真菌/酵母细胞线粒体损伤/氧化(NAO)荧光测定试剂盒
| 网站首页 | 公司介绍 | 产品展示 | 公司新闻 | 资料下载 | 技术文章 | 在线咨询 | 联系我们 |
上海宸功生物技术有限公司 版权所有 总访问量:222899 地址:上海市杨浦区国定东路275号 邮编:
电话: 传真: 手机:18918128223 联系人:陈女士
邮箱:1828267695@qq.com  GoogleSitemap 网址:www.chenbio.com 管理登陆 ICP备案号:沪ICP备16011913号-1