三、技术优势： 1、高通量，低成本：一次测序可得到数百万条序列，单次运行可经济分析多个样品； 2、高分辨率：基于高通量测序技术能够直接从单核苷酸水平研究小分子RNA，不存在传统芯片杂交的荧光模拟信号带来的交叉和背景噪音问题，非常有利于区分相同家族以及序列极为相似的不同sRNA； 3、高精准度：reads能覆盖sRNA全序列，可成功检测低丰度表达的miRNA； 4、通用平台，不依赖已知信息：可进行任何物种的sRNA序列测定，既能鉴定已知的miRNA，又能预测新的miRNA； 5、可重复性高：深度测序保证了抽样随机性，重复性非常好，无需重复实验 四、样本要求： 1、样品类型：完整且无污染的总RNA； 2、样品需求量（单次）：≥10 μg； 3、样品浓度：≥200 ng/μL； 4、样品纯度：OD260/280 =1.8~2.2；OD260/230≥2.0；28S:18S≥1.5；RIN≥8.0；23S:16S≥1.5 （此项要求只针对原核生物）。 五、成功案例： 【案例一】：采用新一代测序技术分析浸水24小时后的玉米种子的小RNA文库，进一步分析确认了115个已知miRNA属于24个miRNA家族，并发现了167个新的玉米miRNA。使用同样的方法，再次建立小RNA文库，将获得的已知miRNA和新发现miRNA的信息与重新构建的小RNA文库进行比对，成功推测出106个新miRNA的候选靶标。研究结果显示：玉米浸水种子中存在着miRNA媒介的基因表达调控。 |
