用一端包有橡皮的玻璃棒从冷却的50 mM Hepes, 150 mM NaCl, 3 mM MgCl2, measured pH 7.5, plus inhibitors 中收获细胞,用21号针使传代细胞破裂。
胞浆蛋白提取方法 通过离心( 1000 ×g for 3 min )收集细胞核,用1% SDS-lysis buffer溶解。 胞浆蛋白提取方法 所得上清液再离心(21,460 ×g for 1 h at 4 °C )得到的片状沉淀物为细胞膜/细胞骨架,上清中的蛋白为细胞质部分的。 胞浆蛋白提取方法 片状的细胞膜/细胞骨架沉淀用1% SDS-lysis buffer全部重悬。 胞浆蛋白提取方法 用TritonX-100-buffer (100 mM phosphate buffer, 150 mM NaCl, measured pH 8, 1.5% TritonX-100, 10% glycerol, plus inhibitors)处理细胞膜,将膜被分为可溶和不可溶两部分,通过离心(21,460 ×g for 60 min )取沉淀,用SDS-buffer将细胞骨架相连的膜重悬。 胞浆蛋白提取方法 END 注意事项 正确规范的使用化学药剂和仪器。 本经验涉及专业步骤需要具备一定专业知识才能进行。 |