用一端包有橡皮的玻璃棒从冷却的50 mM Hepes, 150 mM NaCl, 3 mM MgCl2, measured pH 7.5, plus inhibitors 中收获细胞，用21号针使传代细胞破裂。
胞浆蛋白提取方法
通过离心（ 1000 ×g for 3 min ）收集细胞核，用1% SDS-lysis buffer溶解。 胞浆蛋白提取方法
所得上清液再离心（21,460 ×g for 1 h at 4 °C ）得到的片状沉淀物为细胞膜/细胞骨架，上清中的蛋白为细胞质部分的。 胞浆蛋白提取方法
片状的细胞膜/细胞骨架沉淀用1% SDS-lysis buffer全部重悬。 胞浆蛋白提取方法
用TritonX-100-buffer (100 mM phosphate buffer, 150 mM NaCl, measured pH 8, 1.5% TritonX-100, 10% glycerol, plus inhibitors)处理细胞膜，将膜被分为可溶和不可溶两部分，通过离心（21,460 ×g for 60 min ）取沉淀，用SDS-buffer将细胞骨架相连的膜重悬。 胞浆蛋白提取方法
END
注意事项
正确规范的使用化学药剂和仪器。
本经验涉及专业步骤需要具备一定专业知识才能进行。 |
