根据显色方法主要有以下几种：
放射自显影 底物化学发光 ECL 底物荧光 ECF 底物 DAB 呈色 现在常用的有底物化学发光 ECL 和底物 DAB 呈色，体同水平和实验条件的是用*种方法，目前发表文章通常是用底物化学发光 ECL。只要买现成的试剂盒就行， 操作也比较简单，原理如下（二抗用 HRP 标记）：反应底物为过氧化物 + 鲁米诺，如遇到 HRP，即发光，可使胶片曝光，就可洗出条带。
实验常见的问题指南
01
参考书推荐 A. 对初学者看什么资料比较好？ 解答：《抗体技术实验指南》和 Antibodies（a laboratory manual， wrote by Ed Harlow ，david lane）两本书不错。
02
针对样品的常见问题 此处内容较多，有部分答案省略，想查看更多详情，请点击【阅读原文】查看。 B. 做线粒体膜 UCP2 蛋白的 Western Blot（以下简写成 Western Blot），提取线粒体后冻存（未加蛋白酶抑制剂），用的博士德的一抗，开始还有点痕迹，现在越来越差，上样量已加到 120 μg，换了个 santa cloz 的一抗仍不行。是什么原因？蛋白酶抑制剂单加 PMSF 行吗？ 解答：怀疑是样品问题，可能是：1，样品不能反复冻融；2，样品未加蛋白酶抑制剂。同时，建议检查 Western Blot 过程， 提高一抗浓度。对于加蛋白酶抑制剂来说，一般加 PMSF 就可以了，好能多加几中种蛋白酶抑制剂。 C. 细胞水平要做 Western Blot，多少细胞提的蛋白够 Western Blot？ 解答：一般地 5* 106 就足够了。 D. 同一样品能同时提 RNA 又提蛋白吗，这样对 Western Blot 有无影响? 解答：能，没有问题，我们做过。 E. 同一蛋白样品能同时进行两种因子的 Western Blot 检测吗？ F. 如果目标蛋白是膜蛋白或是胞浆蛋白，操作需要注意什么？
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抗体 T. 做细胞信号传导，要做磷酸化某因子 Western Blot，其二抗有何要求？ 解答：对二抗无要求，要看你实验条件来选择，一般推荐用 HRP 标记的二抗。 U. 同一公司的另外抗体用这个稀释度做出来效果很好，所以没做预试，怕费时间，用什么样的稀释度比较好呢？我用的 ELL + plus 试剂盒显色。转膜过夜，一抗孵育也是过夜的，若封闭也过夜的话就要四天才看的到结果了。
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滤纸、胶和膜的问题 |
