台盼蓝染色法的操作步骤 材料: 1、显微镜、玻片、盖玻片、滴管; 2、试剂:0.4%台盼蓝染液; 3、台盼蓝(Trypan blue):0.4g; 4、生理盐水:100ml; 台盼蓝染色法操作步骤: 1、用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液; 2、用0.5%胰蛋白酶:0.2%EDTA=1:1混合液来消化培养的贴壁细胞; 3、再加入适量Hanks液制成细胞悬液; 4、将待染色细胞稀释至所需浓度(方法及浓度范围与细胞计数相同); 5、每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴,室温下染3—5min; 6、染色过的细胞材料,取一滴细胞悬液置玻片上,加盖玻片后放高倍镜下观察; 7、死亡的细胞着浅蓝色并膨大,无光泽。活细胞不着色并保持正常形态,有光泽; 8、计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目; 9、统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活率。 (细胞活率(%)=未染色的细胞数/观察的细胞总数×100。) 台盼蓝染色法注意事项: 1、染色时间不能太长,否则活细胞也会逐渐积累染料而染成颜色,使监测结果偏低。 2、另可结合细胞计数方法,同时进行细胞计数和活力检测。 3、有潜在致癌危险,为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 台盼蓝(Trypan Blue)或称台盼兰、锥虫蓝,是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性与细胞的存活率,是组织和细胞培养中常用的死细胞鉴定染色方法之一。 |