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CCK8检测服务 实验耗材

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产品特点:
CCK8检测服务可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为:该试剂中含有WST-8[化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐],它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓*(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan

WST-8属于MTT的升级产品,工作原理为:在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物(formazan)。颜色的深浅与细胞的增殖成正比,与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值,间接反映活细胞数量。上海创赛提:供WST-8水溶性四氮唑-8,193149-74-5,商品编号:CLS-42493-100mg,价格930元

  CCK法应用非常广泛,如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。

  CCK法的操作步骤

  实验一:细胞活性检测

  1、在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔),将培养板放在培养箱中预培养(37℃,5% CO2)。

  2、向每孔加入10 μL CCK溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。

  3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

  4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

  5、若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。

  实验二:细胞增殖-毒性检测

  1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(37℃,5% CO2)。

  2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。

  3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24或48小时)。

  4、向每孔加入10μL CCK溶液(注意不要再孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。

  5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

  6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

  7、若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。

  注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。上海创赛提供供:65162-13-2,1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸甲酯盐[用于生化研究],商品编号:C12-M1442-200MG,价格1974元

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