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上海哈灵生物专家对ELISA试剂盒的评价
点击次数:1621 发布时间:2017-05-31
 

上海哈灵生物专家对ELISA试剂盒的评价

 

ELISA试剂盒是一种十分常用的定性定量检测方法,人体和动物、体外细胞培养中80%以上蛋白定量都使用其作为检测的方法。ELISA试剂盒价格一般非常昂贵,但各家试剂公司的试剂盒质量却鱼龙混杂。ELISA试剂盒既有用于科研的,也有用于临床诊断的。应用于临床诊断的试剂盒必须通过卫生部门的许可,国家对用于临床诊断的试剂盒有相当严格的规定和要求,并制定出了相关的规则来管理试剂盒的质量。

 

仔细阅读说明书,对说明书的内容做一个详细的了解。审查内容包括:

1. 试剂盒的名称:ELISA试剂盒名称一般由“(物种)+(测定指标)+酶联免疫试剂盒(ELISA)”,物种和测定指标不能混淆,否则买错了就是你的事情;另外有的试剂盒说明书试剂盒名称明显与写在试剂盒上的名称不符,这要引起你的警惕。

2. 用途:应用于科研还是临床诊断,用于临床诊断的要有卫生部的批准文号。

3. 测定原理:现在ELISA试剂盒除了是测定抗体的以外,一般使用的是双抗体夹心法,这种方法大多数用的是增强的双抗体夹心法,即使用生物素-亲和素系统,还有少数的指标可能使用竞争法,这类方法适用于半抗原的测定。具有复杂结构的多表位蛋白抗原,其双抗体夹心法中的一个抗体必须用单抗。当然如果两个都是单抗(这两个单抗针对不同表位),那么测定的线性范围就较宽,试剂盒性能就较好;一个用单抗,一个用多抗,测定的灵敏度会更好。某些简单的化合物用ELISA测定时,因为没有两个或以上的表位,一般只能作为半抗原,只能用竞争法测定。如果发现有测定简单化合物(如雌激素、NO等)用双抗体夹心法作测定原理时,这个试剂盒你就要怀疑了。另外还要说明一步双抗体夹心法与两步双抗体夹心法的区别。一步双抗体夹心法的吸光度-剂量曲线呈钟形,随着待则标本中抗原浓度的增加而提升至一定程度后,测定吸光度即随抗原浓度的增加而开始下降直至不显色,即所谓的“钩状效应”(hook eHect),也就是我们在免疫沉淀试验中所称的“带现象”(zone phenomenon)。所以当使用一步双抗体夹心法时,样品浓度太好,有时会出现测不出来的现象,此时要作适当的稀释才能准确测定。

4. 试剂盒的组成:用双抗体夹心法作为测定的方法时,试剂盒的组成一般包括:已包被单抗的酶标板:一块,有96孔的,也有48孔的,可拆缷,有铝箔袋密封,打开后有干燥剂,实验时暂未使用的酶标条要连带干燥剂密封好,放在4℃冰箱中妥善保存。而应用于科研的试剂盒,国家则没有出台相关的质量管理规定,因此试剂盒质量也就无法保障。在这种情况下,许多劣质的试剂盒在市场泛滥,不少同行为此浪费了大量的时间和金钱,却没有得到一个良好的实验结果。给战友们介绍一下如何判断试剂盒的质量,选购好的试剂盒。

 

ELISA质量保证是一个复杂的过程,许多重要的环节都影响到检测的质量:
一、操作因素对ELISA结果的影响
ELISA操作步骤复杂,操作不当会产生较大的误差。
产生较大误差的影响因素有:
1.加样
2.温育
3.洗涤
4.显色
5.比色

二、灰区的设置通常情况下,ELISA定性实验以“阳性”和“阴性”来衡量结果,两者间有一条分界线被称为“阳性判断值”(cut-off value,CO值),这是定性免疫测定结果报告的依据。

三、标本复查ELISA手工检测过程复杂,影响因素较多,即使室内质控在控,也可能因孔间差异而造成结果的差异,因此加大复查力度是保证结果准确性的可靠方法,比如对HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等项目的可疑、弱阳性标本及少见模式的检测结果进行复查。

四、结果判断和报告常用下列几种方法表示结果:
1.定性测定
2.半定量测定 结果一般以滴度表示。
3.定量测定 即用已知量的标准品作一系列稀释后进行ELISA测定,绘制标准曲线,结果以量或单位表示。在ELISA定量检测中每一块反应板都必须绘制相应的标准曲线。
4.结果报告

 
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