上海哈灵生物专家对ELISA试剂盒的评价

ELISA试剂盒是一种十分常用的定性定量检测方法，人体和动物、体外细胞培养中80％以上蛋白定量都使用其作为检测的方法。ELISA试剂盒价格一般非常昂贵，但各家试剂公司的试剂盒质量却鱼龙混杂。ELISA试剂盒既有用于科研的，也有用于临床诊断的。应用于临床诊断的试剂盒必须通过卫生部门的许可，国家对用于临床诊断的试剂盒有相当严格的规定和要求，并制定出了相关的规则来管理试剂盒的质量。

仔细阅读说明书，对说明书的内容做一个详细的了解。审查内容包括：

1. 试剂盒的名称：ELISA试剂盒名称一般由“（物种）＋（测定指标）＋酶联免疫试剂盒（ELISA）”，物种和测定指标不能混淆，否则买错了就是你的事情；另外有的试剂盒说明书试剂盒名称明显与写在试剂盒上的名称不符，这要引起你的警惕。

2. 用途：应用于科研还是临床诊断，用于临床诊断的要有卫生部的批准文号。

3. 测定原理：现在ELISA试剂盒除了是测定抗体的以外，一般使用的是双抗体夹心法，这种方法大多数用的是增强的双抗体夹心法，即使用生物素-亲和素系统，还有少数的指标可能使用竞争法，这类方法适用于半抗原的测定。具有复杂结构的多表位蛋白抗原，其双抗体夹心法中的一个抗体必须用单抗。当然如果两个都是单抗（这两个单抗针对不同表位），那么测定的线性范围就较宽，试剂盒性能就较好；一个用单抗，一个用多抗，测定的灵敏度会更好。某些简单的化合物用ELISA测定时，因为没有两个或以上的表位，一般只能作为半抗原，只能用竞争法测定。如果发现有测定简单化合物（如雌激素、NO等）用双抗体夹心法作测定原理时，这个试剂盒你就要怀疑了。另外还要说明一步双抗体夹心法与两步双抗体夹心法的区别。一步双抗体夹心法的吸光度-剂量曲线呈钟形，随着待则标本中抗原浓度的增加而提升至一定程度后，测定吸光度即随抗原浓度的增加而开始下降直至不显色，即所谓的“钩状效应”（hook eHect），也就是我们在免疫沉淀试验中所称的“带现象”（zone phenomenon）。所以当使用一步双抗体夹心法时，样品浓度太好，有时会出现测不出来的现象，此时要作适当的稀释才能准确测定。

4. 试剂盒的组成：用双抗体夹心法作为测定的方法时，试剂盒的组成一般包括：已包被单抗的酶标板：一块，有96孔的，也有48孔的，可拆缷，有铝箔袋密封，打开后有干燥剂，实验时暂未使用的酶标条要连带干燥剂密封好，放在4℃冰箱中妥善保存。而应用于科研的试剂盒，国家则没有出台相关的质量管理规定，因此试剂盒质量也就无法保障。在这种情况下，许多劣质的试剂盒在市场泛滥，不少同行为此浪费了大量的时间和金钱，却没有得到一个良好的实验结果。给战友们介绍一下如何判断试剂盒的质量，选购好的试剂盒。

ELISA质量保证是一个复杂的过程，许多重要的环节都影响到检测的质量：
一、操作因素对ELISA结果的影响
ELISA操作步骤复杂，操作不当会产生较大的误差。
产生较大误差的影响因素有：
1.加样
2.温育
3.洗涤
4.显色
5.比色

二、灰区的设置通常情况下，ELISA定性实验以“阳性”和“阴性”来衡量结果，两者间有一条分界线被称为“阳性判断值”（cut-off value，CO值），这是定性免疫测定结果报告的依据。

三、标本复查ELISA手工检测过程复杂，影响因素较多，即使室内质控在控，也可能因孔间差异而造成结果的差异，因此加大复查力度是保证结果准确性的可靠方法，比如对HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等项目的可疑、弱阳性标本及少见模式的检测结果进行复查。

四、结果判断和报告常用下列几种方法表示结果：
1.定性测定
2.半定量测定 结果一般以滴度表示。
3.定量测定 即用已知量的标准品作一系列稀释后进行ELISA测定，绘制标准曲线，结果以量或单位表示。在ELISA定量检测中每一块反应板都必须绘制相应的标准曲线。
4.结果报告