用户自备 1.5 毫升离心管:用于样品操作的容器 微型台式离心机:用于样品染色操作的容器 血细胞计数器:用于细胞计数 载玻片和盖玻片:用于细胞爬片 (共聚焦)荧光显微镜:用于观察染色的细胞
实验步骤2 1. 移取新鲜获得的 1 毫升(48 小时内)到 1.5 毫升离心管 2. 放进 37℃培养箱孵育 30 分钟 3. 放进微型台式离心机离心 5 分钟,速度为 600g 4. 小心抽去上清液 5. 加入 xx 毫升保存液(Reagent A),混匀颗粒群 6. 在血细胞计数器上进行细胞计数,并调整到 2 X 107 细胞/毫升 7. 移取 100 微升细胞到新的 1.5 毫升离心管 8. 加入 xx 微升染色液 A(Reagent B),混匀 9. 37℃温度下孵育 10 分钟,避免光照 10.小心加入 xx 微升染色液 B(Reagent E),混匀 11.37℃温度下孵育 10 分钟,避免光照 12.移取 50 微升到载玻片上 13.小心抽去染色液 14.盖上盖玻片 15.即刻在(共聚焦)荧光显微镜下观察并计数(注意:每个视野计数 200 个) 观察绿色荧光—染色液 B(Reagent E):滤波器激发波长 490nm,散发波长 520nm 观察红色荧光—染色液 A(Reagent B):滤波器激发波长:488nm;散发波长:630nm 16.分析结果 分类
染色结果 意义 I 整个头部呈现明亮绿色荧光 质膜完整(intact) II 整个或部分头部呈现红色荧光 质膜*损伤(damaged) III 整个头部呈现橘黄色荧光 质膜损伤
注意事项 1. 本产品为 20 次操作 2. 操作时须戴手套 3. 样品检测前,建议在血细胞计数器上进行细胞计数 4. 细胞计数时乘上稀释倍数 104。标准血细胞计数器(Hemocytometer)的计算方法是: 1 毫米方块的细胞计数 X 104(稀释倍数)=实际细胞数/毫升 5. 染色完成后,即刻进行检测分析 6. 本公司提供系列发育生物学相关检测试剂产品
质量标准 1. 本产品经鉴定性能稳定 2. 本产品经鉴定荧光清晰 |