24小时服务热线

18918128223
网站首页  |  公司介绍  |  产品展示  |  公司新闻  |  资料下载  |  技术文章  |  在线咨询  |  联系我们
产品搜索
产品目录
ELISA试剂盒
标准品
培养基
检测试剂盒
细胞株
点击量多的产品
·
  技术文章 首页 >> 技术文章
线粒体呼吸链复合物I 活性比色法定量检测试剂盒
点击次数:1489 发布时间:2017-01-18

线粒体呼吸链复合物I 活性比色法定量检测试剂盒

产品说明书

主要用途

线粒体呼吸链复合物I(NADH-辅酶Q 还原酶)活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成辅酶Q 同功类似物和特异性抑制剂,通过反应系统测定样品中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)氧化后峰值的降低,即采用比色法测定样品中酶活性的而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适合于各种纯化线粒体样品(动物、人体、酵母)以及细胞或组织裂解悬液样品的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)-辅酶Q 还原酶的特异性活性检测。其用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶,严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,反应优化,检测敏感。

 

技术背景

线粒体呼吸链复合物I,通常称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸辅酶Q还原酶(reduced nicotinamide adeninedinucleotide coenzyme Q reductase;NADH-CoQ reductase),又称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(reduced nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase;NADH dehydrogenase),是线粒体电子传递链中zui大的结构成分:含有30至40多个多肽结构。其特征性的酶活性是鱼藤酮敏感的NADH-辅酶Q还原酶(NADH:Q Reductase)。复合物I催化线粒体内电子由供体NADH传递到内膜上辅酶Q受体(泛醌;ubiquinone)的能量转移反应,为整个呼吸链反应系统的*步。基于辅酶Q底物,在鱼藤酮存在与否的情

况下,通过NADH-辅酶Q还原酶的催化,转化成还原型泛醌(CoQH2),同时还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide;NADH)转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamideadenine dinucleotide;NAD),在分光光度仪下产生吸收峰值的变化(340nm 波长),由此定量测定NADH-辅酶Q还原酶的特异活性。其反应系统是:

 

产品内容

缓冲液(Reagent A)

毫升

反应液(Reagent B)

毫升

阴性液(Reagent C)

毫升

底物液(Reagent D)

微升

专性液(Reagent E)

微升

说明书

1 份

 

保存方式

保存在-20℃冰箱里,避免反复冻融;反应液(Reagent B)含有毒性物质,避免直接用手接触;反应液(ReagentB)和底物液(Reagent D),避免光照,有效保证6 月

 

用户自备

比色皿:用于比色分析的容器

双波长分光光度仪:用于比色分析

培养箱:用于孵育反应物

 

实验步骤

实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化;缓冲液(Reagent A)室温预热;反应液(Reagent B)和底物液(Reagent D)注意避光。然后进行下列操作。

 

一、测定准备

1. 准备好待测样品(例如纯化线粒体样品等),置于冰槽里(注意:检测前溶解线粒体;参见注意事项4)

2. 设定好双波长分光光度仪(温度为30℃):波长分别为340nm 和380nm,间隔30 秒,读数7 次(共3分钟),并置零(注意:参见注意事项10)

 

二、背景对照测定

1. 移取xx 微升缓冲液(Reagent A)到新的比色皿

2. 加入xx 微升反应液(Reagent B)

3. 加入xx 微升底物液(Reagent D)

4. 放进30℃培养箱里静置3 分钟

5. 加入xx 微升阴性液(Reagent C)

6. 上下倾倒数次,混匀(限定在3 秒之内)

7. 即刻放进分光光度仪检测,此为背景空对照:

(340 波长读数-380 波长读数)0 分钟-(340 波长读数-380 波长读数)1 分钟或3 分钟

 

三、样品总活性测定

1. 移取xx 微升缓冲液(Reagent A)到新的比色皿

2. 加入xx 微升反应液(Reagent B)

3. 加入xx 微升底物液(Reagent D)

4. 放进30℃培养箱里静置3 分钟

5. 加入100 微升待测样品(注意:10 微克总线粒体蛋白;样品须溶解;参见注意事项4)

6. 上下倾倒数次,混匀(限定在3 秒之内)

7. 即刻放进分光光度仪检测,此为样品总活性读数:

(340 波长读数-380 波长读数)0 分钟-(340 波长读数-380 波长读数)1 分钟或3 分钟

 

四、样品非特异活性测定

1. 移取xx 微升缓冲液(Reagent A)到新的比色皿

2. 加入xx 微升反应液(Reagent B)

3. 加入xx 微升专性液(Reagent E)

4. 加入xx 微升底物液(Reagent D)

5. 放进30℃培养箱里静置3 分钟

6. 加入100 微升待测样品(注意:10 微克总线粒体蛋白;样品须溶解;参见注意事项4)

7. 上下倾倒数次,混匀(限定在3 秒之内)

8. 即刻放进分光光度仪检测,此为样品非特异活性读数:

(340 波长读数-380 波长读数)0 分钟-(340 波长读数-380 波长读数)1 分钟或3 分钟

 

五、计算样品活性

1)样品活性(总活性或非特异活性)

2)样品特异活性

 

注意事项

1. 本产品为30 次(15 个样本)操作,包括背景对照测定

2. 操作时,须戴手套

3. 系统操作过程中,背景测定只需1 次

4. 线粒体样品检测前,须溶解;建议冻存融解(-70℃至37℃)循环3 次或使用线粒体溶解试剂盒

5. 加入样品启动反应后3 秒内即刻比色测定

6. 通常反应1 分钟后比色测定值趋于稳定;测定值由高到低变化;测定可以持续3 分钟

7. 测定值由高到低变化,即3 分钟测定读数低于0 分钟测定读数,表明有酶活性

8. 比色测定后,比色皿须清洗*

9. 通常比色测定的OD340 起始读数0.5 为理想状态

10.如果用户没有双波长同步测定分光光度仪,可以使用单波长340nm 替代,注意活性计算时,毫摩尔吸光系数变成6.2

11.建议待测样本线粒体蛋白浓度为10 微克/100 微升;如果样本酶活性过低或过高,则可以增加或降低样本量;注意计算公式的调整

12.如果使用细胞或组织裂解悬液,则蛋白浓度为50 微克/100 微升

13.样品特异活性是指鱼藤酮敏感的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸-辅酶Q 还原酶,去除其它干扰因素(例如复合物II/III/IV 等)

14.线粒体呼吸链复合物I(NADH-辅酶Q 还原酶)单位活性定义为:在30℃,pH 7.5 条件下,每分钟内能够氧化1 微摩尔还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)所需的酶量作为一个活性单位

15.本公司提供系列线粒体及其酶类技术产品

 

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定

2. 本产品经鉴定检测准确

上一章:RPMI 1640 细胞培养液产品说明书 下一章:PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒
推荐产品
·小鼠c-fos ELISA试剂盒价格
·小鼠还原型谷胱甘肽(GSH)ELISA试剂盒价格
·小鼠氧化型谷胱甘肽(GSSG)ELISA试剂盒价格
·小鼠解整合素样金属蛋白酶9(ADAM9)ELISA试剂盒价格
·小鼠钥孔虫戚血蓝蛋白(KLH)ELISA试剂盒价格
·小鼠抗核抗体(ANA)ELISA试剂盒价格
最新产品
·脂质组学全定量服务
·靶标定量服务
·固相微萃取服务
·靶标代谢组学服务
·cirRNA测序服务
·miRNA测序服务
·lncRNA测序服务
·mRNA测序服务
较早新闻
·备货通知函
·配制只需三分钟,快来申请试用片剂PBS吧
·ELISA试剂盒实验操作技巧
·小心买到ELISA试剂盒假货
·放 假 通 知
·上海哈灵生物专家对ELISA试剂盒的评价
较早技术文章
·细胞骨架(肌动蛋白微丝;F-ACTIN)绿色荧光染色试剂盒
·石蜡切片脂质油红O间接染色试剂盒
·活体细胞溶酶体膜通透性(LMP)/完整性吖啶橙荧光检测流程
·细胞内质网内钙离子浓度荧光检测试剂盒
·冰冻切片总胆固醇(酯酶法)菲律宾)荧光染色试剂盒
·真菌/酵母细胞线粒体损伤/氧化(NAO)荧光测定试剂盒
| 网站首页 | 公司介绍 | 产品展示 | 公司新闻 | 资料下载 | 技术文章 | 在线咨询 | 联系我们 |
上海宸功生物技术有限公司 版权所有 总访问量:223004 地址:上海市杨浦区国定东路275号 邮编:
电话: 传真: 手机:18918128223 联系人:陈女士
邮箱:1828267695@qq.com  GoogleSitemap 网址:www.chenbio.com 管理登陆 ICP备案号:沪ICP备16011913号-1