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冰冻切片动物肌肉组织(ATP)分型染色试剂盒
点击次数:2881 更新时间:2017-01-18

冰冻切片动物肌肉组织(ATP)分型染色试剂盒

产品说明书
主要用途
ATP 酶法冰冻切片动物肌肉组织分型染色试剂是一种旨在使用钙激活技术,在碱性或酸性条件下,由三磷
酸腺苷酶催化水解产生的磷酸与钙离子结合,经过氯化钴的替换,zui后在硫化铵存在的情况下,呈现组织
样本中酶活性部位的不同深浅棕色沉淀现象的而经典的技术方法。该技术经过精心改良、成功实验证
明的。主要适用于动物组织冰冻切片的酶活性检测,即动物肌肉组织纤维的分型鉴定。产品严格无菌,即
到即用,操作简捷,性能稳定,灵敏牢固,显色清晰。
技术背景
三磷酸腺苷酶或ATP 酶(adenosinetriphosphatase;ATPase)可催化ATP 水解生成ADP 及无机磷的反应,
这一反应放出大量能量,用于运送离子进出细胞,同时供给生物体进行需能生命过程。它存在于生物细胞
的多个部位,比如肌质网/内质网质膜上,对整个生命的维持有着重要的作用。其中骨骼肌受到神经冲动的
刺激,肌浆内钙离子浓度升高,肌质网/内质网钙泵ATP 酶(sarcoplasmic or endoplasmic reticulum calcium
ATPases;SERCA)激活,分解ATP 释放能量,肌肉收缩。动物肌肉由两种纤维构成,即I 型或红肌,又
称为慢纤维(slow twitch),和II 型或白肌,又称为(fast twitch)。I 型和II 型肌纤维混合镶嵌排列成“棋
盘样(checkerboard)”结构。I 型和II 型纤维的比例取决于肌肉在机体中的位置和它的功能,相较于II
型肌,I 型肌的肌球蛋白含量高,线粒体多,毛细血管密度高,糖原低,适合于有氧呼吸,持久收缩。一
般的肌肉,其纤维分布是II 型纤维(60 至65%)2 倍于I 型纤维。通过有别于人体肌肉组织ATP 酶染色的
酸碱性,可以显示动物两型肌纤维。三磷酸腺苷酶(ATP 酶)水解三磷酸腺苷为二磷酸腺苷和磷酸,并释
放出能量。磷酸与钙离子结合,在酶活性处形成无色的磷酸钙,磷酸钙经氯化钴处理形成磷酸钴,再经硫
化铵处理形成棕黑色的硫化钴沉淀在酶活性部位。
产品内容
碱性液(Reagent A) 毫升
酸性液(Reagent B) 毫升
反应液(Reagent C) 毫升
激活液(Reagent D) 毫升
置换液(Reagent E) 毫升
清理液(Reagent F) 毫升
显色液(Reagent G) 毫升
产品说明书1 份
保存方式
保存反应液(Reagent C)在-20℃冰箱里,避免反复冻融,避免光照;其余的保存在4℃冰箱里,有效保
证6 月
2
用户自备
苏木素复染试剂盒:用于常规染色后复染
培养箱:用于反应孵育
小型染色缸:用于染色清洗操作
光学显微镜:用于染色后观察分析
实验步骤
实验开始前,将试剂盒里的反应液(Reagent C)从-20℃的冰箱里取出,放进冰槽里融化,避免光照。然
后进行下列操作:
一、样本激活处理
1. 取出2 片待测的5 至10 微米厚的冰冻组织切片,标记为1 和2(注意:参见注意事项3 和4)
2. 小心加上xx 微升碱性液(Reagent A)在1 号切片上,铺满整个样品表面
3. 室温下孵育15 分钟
4. 同时小心加上xx 微升酸性液(Reagent B)在2 号切片上,铺满整个样品表面
5. 室温下孵育5 分钟
6. 小心移去2 号切片上的酸性液(Reagent B)
7. 加上xx 微升碱性液(Reagent A)在2 号切片上,铺满整个样品表面
8. 室温下孵育30 秒
9. 小心移去1 号和2 号切片上的碱性液(Reagent A)
10.分别加上xx 微升反应液(Reagent C),铺满整个样品表面
11.放进37℃培养箱里,孵育30 分钟
12.小心移去反应液(Reagent C)
13.小心加上xx 微升激活液(Reagent D),铺满整个样品表面
14.室温下孵育3 分钟
15.小心移去激活液(Reagent D)
16.重复实验步骤13 至15 二次
二、样本染色处理
1. 小心加上xx 微升置换液(Reagent E),铺满整个样品表面
2. 室温下孵育3 分钟
3. 小心移去置换液(Reagent E)
4. 室温下,小心将切片置入xx 毫升清理液(Reagent F)中孵育1 分钟
5. 小心移去切片上的清理液(Reagent F)
6. 小心加上xx 微升显色液(Reagent G),铺满整个样品表面
7. 室温下孵育30 至60 秒;或持续孵育直至可见浅棕和深棕色为止
8. 小心移去显色液(Reagent G)
9. 室温下,小心将切片置入xx 毫升清理液(Reagent F)中孵育2 分钟
10.小心移去切片上的清理液(Reagent F)
3
三、(选择步骤)样本复染处理
1. 样本复染处理(苏木素)
2. 放上盖玻片或封片
3. 即刻在一般光学显微镜下观察
肌纤维类型1 号切片2 号切片
Ⅰ 浅棕色深棕色
ⅡA 深棕色浅棕色
ⅡB 深棕色中度棕色
注意事项
1. 本产品为20 次操作
2. 操作时,须带手套
3. 建议组织快速冷冻,避免切片冰晶形成
4. 冰冻切片不可固定处理
5. 试剂溶液在样品表面时,避免有气泡存在,同时确保铺满样品表面
6. 组织细胞染色注意不要过度
7. 可以使用有机溶剂(乙醇、二甲苯等)脱水、透明处理后封片
8. 组织细胞染色完成后,即刻进行光学显微镜观察,否则会逐渐褪色
9. 本公司提供系列特定组织染色试剂产品
质量标准
1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定显色清晰

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